应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于基因的半定量
71/1返回列表
查看: 1268  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[求助] 求助关于基因的半定量

有一批基因要做定量。老板不让用taqman或sybr法，他说pcr一下再跑个电泳看看就行了。我很晕啊。他还说内参要和目的基因在用一个管里。我想问：
1.那么两对引物（内参和目的基因）在同一个管子里是否PCR产物片段大小得相差比较大？
2.这属于多重PCR，好不好做？有什么要注意的？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-12-08 10:13:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jeffzm

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

xuehu2008(金币+1): 2011-12-10 02:50:22
弄个混合体系不行啊？只引物不一样
赞一下 回复此楼
2楼2011-12-08 10:19:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xuehu2008(金币+2): 2011-12-10 02:50:36
是可以的，内参要和你的目的基因相差大点，而且你的条件要摸索一下，内参退火温度的范围比较大，主要是你的目的基因要摸好条件
赞一下 回复此楼
3楼2011-12-08 19:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xuehu2008(金币+2): 2011-12-10 02:51:50
引用回帖:
1楼: Originally posted by xuehu2008 at 2011-12-08 10:13:08:
有一批基因要做定量。老板不让用taqman或sybr法，他说pcr一下再跑个电泳看看就行了。我很晕啊。他还说内参要和目的基因在用一个管里。我想问：
1.那么两对引物（内参和目的基因）在同一个管子里是否PCR产物片段大 ...

呵呵 不打算反驳的话就照做吧
引物设计成Tm相同的  注意引物间的二聚体 错误引发 长度拉开些 相差100bp足够了 胶配浓些再短点也行
先按习惯的体系做一次 根据结果优化 退火温度 各对引物的浓度比例 dNTP浓度 Mg离子浓度 PCR促进剂
两对一起不那么难的
赞一下 回复此楼
4楼2011-12-08 20:48:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

218340

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做的半定量的，要看你两对引物之间会不会形成二聚体，如果可能形成二聚体，那么就不能在一个管内扩增，这就要求你设计好PCR引物，实在不行的话就要分管扩增了。
赞一下 回复此楼
5楼2011-12-09 13:18:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuehu2008

铜虫 (正式写手)
恩，大家说的极有道理。有什么办法能看两对引物之间的二聚体呢？
赞一下 回复此楼
6楼2011-12-10 02:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingdee

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xuehu2008 at 2011-12-10 02:52:39:
恩，大家说的极有道理。有什么办法能看两对引物之间的二聚体呢？

用DNASTAR软件
回复此楼
7楼2012-03-06 11:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xuehu2008 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +8 冬十三 2026-03-15 9/450 2026-03-17 22:37 by 冬十三
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 293求调剂 +7 zjl的号 2026-03-16 12/600 2026-03-17 18:22 by 重科小霸王
[考研] 070300化学319求调剂 +4 锦鲤0909 2026-03-17 4/200 2026-03-17 18:21 by 重科小霸王
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料与化工 +4 安全上岸！ 2026-03-16 4/200 2026-03-17 14:02 by 勇敢太监王公公
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-13 5/250 2026-03-17 10:15 by Sammy2
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-11 8/400 2026-03-17 09:36 by 努力学习赚彩礼
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭