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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » UVP质粒凝胶定量分析
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Sofia1004

新虫 (小有名气)

[求助] UVP质粒凝胶定量分析

我们实验室的凝胶成像分析系统用的UVP的，每次跑完电泳，师兄师姐都用肉眼对比一下亮度，通过Marker判断质粒有多少ng。我觉得肉眼判断不准，想通过UVP自带的软件分析得到结果，于是自己研究了下。
我的marker是TaKaRa公司的Supercoiled DNA Ladder Marker。通过肉眼判断，我的质粒条带的亮度与marker中最亮的5kbp的条带相同，即150ng。用软件得到的浓度却是50ng。不知道为什么是这个结果。
可能是我用软件用的不对？我们通常不都是看有多少ng吗？软件的定量里用的是浓度，那应该怎么输入和计算啊？直接按ng输，得到的结果也认为是多少ng不行吗？
还有就是北京校正，好像是有好几种方式，比如Rolling Disc,让输入数值，我输了6，这时峰比较尖锐，我也不懂，以为这种情况比较好，应该怎么样设数值啊？是不是这个问题也影响了实验结果啊？
希望高人不吝赐教，不胜感激！或者相关的中文教程的资源，能够提供一下？谢谢！
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1楼 2011-11-30 09:49:37
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Sofia1004

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 高天上圣 at 2011-11-30 21:11:31:
无论是跑胶还是紫外都有误差，紫外的OD值在0.2-0.8之间才可信，最好在0.5左右。跑胶因为光的弥散作用有时误差很大，建议在紫外灯下肉眼观察一下。

说的有道理！不过我这有本实验教科书，说OD在0.1-0.5之间才可信。谢谢！
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6楼2011-12-01 08:31:20
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Sofia1004

新虫 (小有名气)
这是我的凝胶图：中间是我的质粒条带，右一是Supercoiled DNA ladder marker
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2楼2011-11-30 09:59:39
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高天上圣

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Sofia1004(金币+2): 谢谢！ 2011-12-01 08:31:49
Sofia1004(金币+3): 谢谢 2011-12-10 09:27:27
无论是跑胶还是紫外都有误差，紫外的OD值在0.2-0.8之间才可信，最好在0.5左右。跑胶因为光的弥散作用有时误差很大，建议在紫外灯下肉眼观察一下。
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问鼎九州，逐鹿中原！
5楼2011-11-30 21:11:31
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