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Sofia1004

新虫 (小有名气)

[求助] UVP质粒凝胶定量分析

我们实验室的凝胶成像分析系统用的UVP的,每次跑完电泳,师兄师姐都用肉眼对比一下亮度,通过Marker判断质粒有多少ng。我觉得肉眼判断不准,想通过UVP自带的软件分析得到结果,于是自己研究了下。
我的marker是TaKaRa公司的Supercoiled DNA Ladder Marker。通过肉眼判断,我的质粒条带的亮度与marker中最亮的5kbp的条带相同,即150ng。用软件得到的浓度却是50ng。不知道为什么是这个结果。
可能是我用软件用的不对?我们通常不都是看有多少ng吗?软件的定量里用的是浓度,那应该怎么输入和计算啊?直接按ng输,得到的结果也认为是多少ng不行吗?
还有就是北京校正,好像是有好几种方式,比如Rolling Disc,让输入数值,我输了6,这时峰比较尖锐,我也不懂,以为这种情况比较好,应该怎么样设数值啊?是不是这个问题也影响了实验结果啊?
希望高人不吝赐教,不胜感激!或者相关的中文教程的资源,能够提供一下?谢谢!
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Sofia1004

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 高天上圣 at 2011-11-30 21:11:31:
无论是跑胶还是紫外都有误差,紫外的OD值在0.2-0.8之间才可信,最好在0.5左右。跑胶因为光的弥散作用有时误差很大,建议在紫外灯下肉眼观察一下。

说的有道理!不过我这有本实验教科书,说OD在0.1-0.5之间才可信。谢谢!
6楼2011-12-01 08:31:20
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Sofia1004

新虫 (小有名气)

这是我的凝胶图:中间是我的质粒条带,右一是Supercoiled DNA ladder marker


2楼2011-11-30 09:59:39
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高天上圣

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Sofia1004(金币+2): 谢谢! 2011-12-01 08:31:49
Sofia1004(金币+3): 谢谢 2011-12-10 09:27:27
无论是跑胶还是紫外都有误差,紫外的OD值在0.2-0.8之间才可信,最好在0.5左右。跑胶因为光的弥散作用有时误差很大,建议在紫外灯下肉眼观察一下。
问鼎九州,逐鹿中原!
5楼2011-11-30 21:11:31
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