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UVP质粒凝胶定量分析
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我们实验室的凝胶成像分析系统用的UVP的,每次跑完电泳,师兄师姐都用肉眼对比一下亮度,通过Marker判断质粒有多少ng。我觉得肉眼判断不准,想通过UVP自带的软件分析得到结果,于是自己研究了下。 我的marker是TaKaRa公司的Supercoiled DNA Ladder Marker。通过肉眼判断,我的质粒条带的亮度与marker中最亮的5kbp的条带相同,即150ng。用软件得到的浓度却是50ng。不知道为什么是这个结果。 可能是我用软件用的不对?我们通常不都是看有多少ng吗?软件的定量里用的是浓度,那应该怎么输入和计算啊?直接按ng输,得到的结果也认为是多少ng不行吗? 还有就是北京校正,好像是有好几种方式,比如Rolling Disc,让输入数值,我输了6,这时峰比较尖锐,我也不懂,以为这种情况比较好,应该怎么样设数值啊?是不是这个问题也影响了实验结果啊? 希望高人不吝赐教,不胜感激!或者相关的中文教程的资源,能够提供一下?谢谢! |
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