24小时热门版块排行榜    

查看: 1270  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

纳兰欣光

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量曲线问题

刚开始做荧光定量PCR,用的内参基因是18SrRNA,分别用他们的质粒10倍稀释8管做标准曲线,退火温度62度,第一次跑图目的基因居然是这样的,内参的也是一个变化趋势,到底是引物的问题还是模板的问题,还是其他操作的原因呢?请有经验的虫子指点一下啊。。。



回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高天上圣

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物有问题的可能性最大;如果引物保证没问题,从35个循环以后才出峰来看,说明几乎没模板,这个峰是引物二聚体导致的。
问鼎九州,逐鹿中原!
3楼2011-11-30 21:25:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

wangcheng2650

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 个人也是这个看法 2011-11-27 16:22:08
从图上看应该是引物的问题,特异性不强,产生了较多的非特异性扩增及引物二聚体!建议重新设计引物!
PS:你用的哪家公司的实时荧光定量PCR仪呢?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

日子是混出来的!
2楼2011-11-27 16:03:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纳兰欣光

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangcheng2650 at 2011-11-27 16:03:43:
从图上看应该是引物的问题,特异性不强,产生了较多的非特异性扩增及引物二聚体!建议重新设计引物!
PS:你用的哪家公司的实时荧光定量PCR仪呢?

伯乐的IQ5,可是如果是引物的问题的话,那不会在二十七八个循环处降落的吧?咨询仪器技术人员可能是光路问题。。。
4楼2011-12-01 13:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangcheng2650

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你那个二十七八个循环那个应该不能算是扩增曲线吧?正常曲线是S形的,你那个是引物二聚体造成的假阳性扩增!
日子是混出来的!
5楼2011-12-01 14:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +3 chaojifeixia 2026-03-19 3/150 2026-03-20 05:47 by laoshidan
[考研] 329求调剂 +5 想上学吖吖 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:56 by 23Postgrad
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 化学求调剂 +3 临泽境llllll 2026-03-17 4/200 2026-03-19 13:59 by houyaoxu
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
信息提示
请填处理意见