应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RACE克隆 请帮助鉴别
91/1返回列表
查看: 1074  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] RACE克隆 请帮助鉴别

在做完RACE PCR后，发现有条带，（Fig-1 箭头所指），但是纯化后发现是弥散（Fig-2），不知道为何？？请高手指点

这个弥散的条带能连接大肠杆菌测序吗？

Fig-2



Fig-1
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
1楼 2011-11-24 00:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liaojianglin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

模板需要稀释倍数不够
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-24 10:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

做个巢式吧,估计不是模版量太大,是基因表达量不高吧
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-24 11:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liaojianglin at 2011-11-24 10:29:23:
模板需要稀释倍数不够

能否详细说明
回复此楼
将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
4楼2011-11-24 14:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shaquila at 2011-11-24 11:36:17:
做个巢式吧,估计不是模版量太大,是基因表达量不高吧

巢式PCR的话 是不是在第二轮的时候仍然使用 RACE Kit（我们用的是CloneTECH
）说明手册的PCR程序？？？
赞一下 回复此楼
将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
5楼2011-11-24 14:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-11-24 22:02:11
引用回帖:
1楼: Originally posted by zcqcau at 2011-11-24 00:31:16:
在做完RACE PCR后，发现有条带，（Fig-1 箭头所指），但是纯化后发现是弥散（Fig-2），不知道为何？？请高手指点

这个弥散的条带能连接大肠杆菌测序吗？

[color ...

可以试试克隆，不过不保证能出条带，你可以试试巢式或者降落！RACE出现这种结果也很正常，你就用个扩展能力好的酶就行，也没必要用高保真的！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-11-24 17:20:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goldenleaf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一定做巢式pcr，其相关原理用google一搜就出来，很简单的！
赞一下 回复此楼
7楼2011-11-24 19:07:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cellliu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板浓度太高，稀释模板
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-27 20:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z7531242

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

稀釋個30~50倍然後做巢式PCR應該就可以解決您的問題了!!
protocal:    20 cycles (Poly A+ RNA) OR 25 cycles (Total RNA):
                94°C 30 sec
                68°C 30 sec
                72°C 3 min*
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-01 16:15:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zcqcau 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭