24小时热门版块排行榜    

查看: 7016  |  回复: 12
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

humourhy

新虫 (小有名气)

[求助] 求问紫外分光光度法测RNA浓度和纯度

我的研究方向是做生物材料的,之前对生物学了解很少,不过现在的进度需要涉及一点RT-qPCR的实验,希望大家能够解答我的一点困惑

请问提取出来的RNA,用20uL溶解。如果利用紫外分光光度计测量,用常规的比色皿,需要装3ml的溶液,稀释太多倍了,吸光度很低很难检测。后来委托朋友利用Nanodrop2000检测了下,只需要吸1uL,结果不错,A260/A280=1.94。由于今后开展此方面工作不可能总麻烦朋友,而且这个仪器还挺贵的。所以想请问下大家都是怎么做的呀?

后来我自己查了下,貌似有利用微量比色皿在分光光度计上做的。不知如果采用这个方法,那建议测试稀释多少倍数,且对应吸光度在什么范围比较好呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
humourhy(金币+5): 谢谢您的耐心解答 2011-11-22 10:17:47
西瓜(金币+2): Good! 2011-11-23 20:57:19
这个我们这边测的还挺多的,每次就是洗2 uL样品稀释50倍,总共100 uL加入微量比色皿的底部槽里就行了,测出来的数据还是比较准确的。OD260/OD280值介于1.7-2.0之间表明纯度比较高。
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
3楼2011-11-22 09:37:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-23 20:56:48
我们也是用NanoDrop,这个好用,1ul即可以测的。那种比色杯的方法是旧的,比较老的方法了,麻烦....
如果你朋友不远,你还是麻烦一下他吧。有NanoDrop的话整个测的操作其实很简单,估计不用1分钟测一个,就是点上1ul 样品然后按一下鼠标即有浓度、260/280等数据出来。
伟大航线....
2楼2011-11-21 23:27:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humourhy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gjs713 at 2011-11-22 09:37:30:
这个我们这边测的还挺多的,每次就是洗2 uL样品稀释50倍,总共100 uL加入微量比色皿的底部槽里就行了,测出来的数据还是比较准确的。OD260/OD280值介于1.7-2.0之间表明纯度比较高。

您好,请问下你用的微量比色皿是多少体积的呢?
我这里有的700uL的比色皿,貌似装100uL液面不够高~是不是需要更小的比色皿才合适呀?
听我的师姐说,我们实验室的国产光度计的光源狭缝较宽,对更小体积的比色皿貌似有问题,不知您使用的紫外光度计是什么牌子的呀,进口的还是国产的呢?
非常感谢您的解答~
4楼2011-11-22 10:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humourhy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-21 23:27:51:
我们也是用NanoDrop,这个好用,1ul即可以测的。那种比色杯的方法是旧的,比较老的方法了,麻烦....
如果你朋友不远,你还是麻烦一下他吧。有NanoDrop的话整个测的操作其实很简单,估计不用1分钟测一个,就是点上 ...

呵呵~不失为一个好方法,就是要经常麻烦朋友了
5楼2011-11-22 10:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然评审意见 +7 wangmingqi 2026-08-28 8/400 2026-08-28 18:42 by zhuzg0628
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见