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humourhy新虫 (小有名气)
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求问紫外分光光度法测RNA浓度和纯度
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我的研究方向是做生物材料的，之前对生物学了解很少，不过现在的进度需要涉及一点RT-qPCR的实验，希望大家能够解答我的一点困惑 请问提取出来的RNA，用20uL溶解。如果利用紫外分光光度计测量，用常规的比色皿，需要装3ml的溶液，稀释太多倍了，吸光度很低很难检测。后来委托朋友利用Nanodrop2000检测了下，只需要吸1uL，结果不错，A260/A280=1.94。由于今后开展此方面工作不可能总麻烦朋友，而且这个仪器还挺贵的。所以想请问下大家都是怎么做的呀？ 后来我自己查了下，貌似有利用微量比色皿在分光光度计上做的。不知如果采用这个方法，那建议测试稀释多少倍数，且对应吸光度在什么范围比较好呢？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-11-21 23:27:51
humourhy
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7楼2011-11-22 10:31:28
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！很有经验啊！一般比色皿都说要三分之二体积以上，楼主还需具体参考所用的仪器说明书。 2011-11-23 21:00:13
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！很有经验啊！一般比色皿都说要三分之二体积以上，楼主还需具体参考所用的仪器说明书。 2011-11-23 21:00:13
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我见过有以下几种装备 1ul 能测浓度准确方便，能用这种方法是最好的。 100ul 比起1ul的稍微麻烦，一般要稀释20倍。 700ul 体积的增大越来越不准确，最多稀释30倍。 1ml 最多稀释30倍 关于700以上的比色皿个人认为液体要放到总体积的三分之二。 当然要看你们分光器的光路能穿越的位置。要是能穿越比色杯的三分之一那就加三分之一就可以。切忌不能人为提起比色杯让光路穿透。误差巨大。 |
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humourhy10楼2011-11-23 12:37:53
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9楼2011-11-23 09:13:59
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