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humourhy

新虫 (小有名气)

[求助] 求问紫外分光光度法测RNA浓度和纯度

我的研究方向是做生物材料的,之前对生物学了解很少,不过现在的进度需要涉及一点RT-qPCR的实验,希望大家能够解答我的一点困惑

请问提取出来的RNA,用20uL溶解。如果利用紫外分光光度计测量,用常规的比色皿,需要装3ml的溶液,稀释太多倍了,吸光度很低很难检测。后来委托朋友利用Nanodrop2000检测了下,只需要吸1uL,结果不错,A260/A280=1.94。由于今后开展此方面工作不可能总麻烦朋友,而且这个仪器还挺贵的。所以想请问下大家都是怎么做的呀?

后来我自己查了下,貌似有利用微量比色皿在分光光度计上做的。不知如果采用这个方法,那建议测试稀释多少倍数,且对应吸光度在什么范围比较好呢?
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humourhy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gjs713 at 2011-11-22 09:37:30:
这个我们这边测的还挺多的,每次就是洗2 uL样品稀释50倍,总共100 uL加入微量比色皿的底部槽里就行了,测出来的数据还是比较准确的。OD260/OD280值介于1.7-2.0之间表明纯度比较高。

您好,请问下你用的微量比色皿是多少体积的呢?
我这里有的700uL的比色皿,貌似装100uL液面不够高~是不是需要更小的比色皿才合适呀?
听我的师姐说,我们实验室的国产光度计的光源狭缝较宽,对更小体积的比色皿貌似有问题,不知您使用的紫外光度计是什么牌子的呀,进口的还是国产的呢?
非常感谢您的解答~
4楼2011-11-22 10:14:01
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查看全部 13 个回答

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-23 20:56:48
我们也是用NanoDrop,这个好用,1ul即可以测的。那种比色杯的方法是旧的,比较老的方法了,麻烦....
如果你朋友不远,你还是麻烦一下他吧。有NanoDrop的话整个测的操作其实很简单,估计不用1分钟测一个,就是点上1ul 样品然后按一下鼠标即有浓度、260/280等数据出来。
伟大航线....
2楼2011-11-21 23:27:51
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
humourhy(金币+5): 谢谢您的耐心解答 2011-11-22 10:17:47
西瓜(金币+2): Good! 2011-11-23 20:57:19
这个我们这边测的还挺多的,每次就是洗2 uL样品稀释50倍,总共100 uL加入微量比色皿的底部槽里就行了,测出来的数据还是比较准确的。OD260/OD280值介于1.7-2.0之间表明纯度比较高。
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
3楼2011-11-22 09:37:30
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humourhy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-21 23:27:51:
我们也是用NanoDrop,这个好用,1ul即可以测的。那种比色杯的方法是旧的,比较老的方法了,麻烦....
如果你朋友不远,你还是麻烦一下他吧。有NanoDrop的话整个测的操作其实很简单,估计不用1分钟测一个,就是点上 ...

呵呵~不失为一个好方法,就是要经常麻烦朋友了
5楼2011-11-22 10:17:14
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