应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
473/5返回列表上一页12345下一页
查看: 4062  |  回复: 46
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

srlee

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

林夕梦(金币+5): 请不要动怒哈，也许那位虫友的用词不妥。肯定是可以连接的，否则就不会这样设计实验啦。我相信您是连接成功，也相信是有难度的。所以才来求助，求指教的呀 2011-11-18 13:17:01
引用回帖:
19楼: Originally posted by 林夕梦 at 2011-11-18 11:46:54:
呵呵，是呢，好难连的

刚吃过饭回到实验室打开小木虫看到与我相关的帖子，看了回帖我感到很吃惊，仔仔细细的又把我的回帖看了一遍，并招呼其他师兄弟姐妹再帮我看一下回帖也都表示没有问题的！
但是有一个哥们ID为“阿修罗Axuro “的回帖很具有挑战性，直接导致我中午吃饭消化不良。“说什么10K都很容易完全是不负责任，3K以上就很难连了，大于3K的链接效率就直线下降，各大公司的技术支持我都问过，大于3K的就是难连，楼主可以把你的片段发给那个说10K很容易的让他帮你弄。”“表示完全不信，我连3点几K的时候也是一直连不上，咨询各大公司的技术支持，都说大于3K了效率直线下降，第一次听你说10K的都没多大问题。”
本来是不想继续回复的，别人连不连的上实验做不做出来，管我什么事跟我又有什么关系呢？但看到回帖中“完全是不负责任”“楼主可以把你的片段发给那个说10K很容易的让他帮你弄。”本着我自己对自己说话负责任的态度以及以后能继续在小木虫混下去，我还是想确认一下连接10k以上的片段应该是没有问题的，本想把相关的实验图片都贴上去的，但还是算了，回头这哥们又说我这图片是ps的！
Nothing is impossible,自己没见识过的东西那就多看看书吧，别坐井观天说别人说话不负责任，也请那哥们注意以后自己的说话方式。
祝楼主实验顺利！
赞一下 回复此楼
21楼2011-11-18 12:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xupp

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

林夕梦(金币+5): 呵呵，息怒啦，那位同学也是有点激动而已，您们的技术实在是很好啦，还请指教。大家好好探讨，和平探讨哈~~ 2011-11-18 13:19:11
引用回帖:
17楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-11-18 08:42:30:
表示完全不信，我连3点几K的时候也是一直连不上，咨询各大公司的技术支持，都说大于3K了效率直线下降，第一次听你说10K的都没多大问题。

搞笑，我连过12k+31k的，12k+45k的，虽然效率低，但几十个克隆里肯定能有阳性的，各大公司的技术支持估计也是纸上谈兵没有实践过，至于说10k的基本连不上的童鞋们，我只能说你功夫不到，或者运气太差，但是无知的否定别人就太不好了。。。。。。实验顺利哦
赞一下 回复此楼
22楼2011-11-18 12:52:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

说得太笼统，没法回答！！！~
赞一下 回复此楼
每天坚持多一点，以后困难少一点！
23楼2011-11-18 14:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
23楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 14:08:48:
说得太笼统，没法回答！！！~

额，bamh1单酶切的，takaraT4连接酶16度连接过夜，超级感受态30到45s转化，然后就是挑克隆，小抽，再次酶切鉴定了。可是要么没长克隆，要么是假阳性
赞一下 回复此楼
许多奇迹，我们相信，才会实现……
24楼2011-11-18 14:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

林夕梦(金币+3): 额，切2个小时也有的，超过四小时的也有呢 2011-11-18 14:54:47
引用回帖:
24楼: Originally posted by 林夕梦 at 2011-11-18 14:23:51:
额，bamh1单酶切的，takaraT4连接酶16度连接过夜，超级感受态30到45s转化，然后就是挑克隆，小抽，再次酶切鉴定了。可是要么没长克隆，要么是假阳性

BamHI酶切你切了多久啊 这个酶改进版的BamhI HF好些，普通的超过4个小时会乱切的，不知你切了多久
赞一下 回复此楼
25楼2011-11-18 14:49:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★ ★
林夕梦(金币+5): 有道理呢，希望我好运啊，O(∩_∩)O谢谢 2011-11-18 17:11:58
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-19 18:58:57
引用回帖:
24楼: Originally posted by 林夕梦 at 2011-11-18 14:23:51:
额，bamh1单酶切的，takaraT4连接酶16度连接过夜，超级感受态30到45s转化，然后就是挑克隆，小抽，再次酶切鉴定了。可是要么没长克隆，要么是假阳性

你的酶如果是实验室经常用到的话，酶的问题就可以基本排除。你的转化过程也是你经常成功实验的过程的话也应该没问题。根据你的描述是没长克隆或者是假阳性，我自己感觉的话是不是你的大肠杆菌感受态有问题了呢？当然还有很多其他原因的，要一一排除的话你最好进行对照，没对照什么都不能解释的，只能在哪里胡乱猜测~~~望楼主好运~~~
赞一下(1人) 回复此楼
每天坚持多一点，以后困难少一点！
26楼2011-11-18 16:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
26楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 16:54:28:
你的酶如果是实验室经常用到的话，酶的问题就可以基本排除。你的转化过程也是你经常成功实验的过程的话也应该没问题。根据你的描述是没长克隆或者是假阳性，我自己感觉的话是不是你的大肠杆菌感受态有问题了呢？ ...

都是实验室常用的，感受态没问题的，前几天做了个2.4kb的都成功啦。
再考虑双酶切呢
赞一下 回复此楼
许多奇迹，我们相信，才会实现……
27楼2011-11-18 17:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by 林夕梦 at 2011-11-18 17:09:10:
都是实验室常用的，感受态没问题的，前几天做了个2.4kb的都成功啦。
再考虑双酶切呢

你可以考虑双酶切！你这个片段不是算太大哈！应该没问题的~~~
赞一下 回复此楼
每天坚持多一点，以后困难少一点！
28楼2011-11-18 17:12:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
28楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 17:12:51:
你可以考虑双酶切！你这个片段不是算太大哈！应该没问题的~~~

但是要用到not1了，酶切位点为8个碱基额，还要加保护位点，岂不是酶切效率会很低呢
赞一下 回复此楼
许多奇迹，我们相信，才会实现……
29楼2011-11-18 17:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxing5157

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by srlee at 2011-11-18 12:47:37:
刚吃过饭回到实验室打开小木虫看到与我相关的帖子，看了回帖我感到很吃惊，仔仔细细的又把我的回帖看了一遍，并招呼其他师兄弟姐妹再帮我看一下回帖也都表示没有问题的！
但是有一个哥们ID为“阿修罗Axuro “的 ...

完全同意你的看法，我虽然现在才研一，但目前构建的载体不下30个，什么样的片段没有连接过！！！他那句话太不负责任啦！
赞一下 回复此楼
30楼2011-11-18 22:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 林夕梦 的主题更新
473/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 计算机11408，286分求调剂 +7 木子念晞 2026-04-05 7/350 2026-04-05 19:02 by chy09050039
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +9 大火山小火山 2026-04-05 9/450 2026-04-05 18:49 by liuying2007
[考研] 288求调剂 +7 没有答案_ 2026-04-05 7/350 2026-04-05 17:01 by yulian1987
[考研] 298分 070300求调剂 +15 zwen03 2026-04-02 15/750 2026-04-05 12:52 by Hdyxbekcb
[考研] 男生，一志愿沪9生物学071000，初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319 +21 678lucky 2026-03-31 26/1300 2026-04-04 16:22 by dongzh2009
[考研] 265求调剂 +17 林深温澜 2026-04-01 20/1000 2026-04-04 01:09 by userper
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 英一数一408，总分284，二战真诚求调剂 +13 12.27 2026-03-30 15/750 2026-04-03 14:41 by 氮气气气
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 9/450 2026-04-03 12:05 by 1753564080
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考研] 一志愿武汉理工0856，初试334 +3 26考研材料 2026-04-02 3/150 2026-04-02 21:22 by dongzh2009
[考研] 321求调剂 一志愿 浙江工业大学生物医药 +5 嘿嘿HC 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:23 by sophie2180
[考研] 311求调剂 +14 蓝月亮亮 2026-03-30 14/700 2026-04-02 12:18 by 1753564080
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭