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[求助]
3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建
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如题，基因片段3.7Kb载体7Kb，Phage载体。 连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆，要么长出来也是假阳性，小提质粒后酶切片段大小不对额  大片段不好连呢，求高手指教有妙招改进么？？  (转化采用的超级感受态细胞，42度30s) |
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srlee
铁杆木虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
林夕梦(金币+5): 请不要动怒哈，也许那位虫友的用词不妥。肯定是可以连接的，否则就不会这样设计实验啦。我相信您是连接成功，也相信是有难度的。所以才来求助，求指教的呀 2011-11-18 13:17:01
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刚吃过饭回到实验室打开小木虫看到与我相关的帖子，看了回帖我感到很吃惊，仔仔细细的又把我的回帖看了一遍，并招呼其他师兄弟姐妹再帮我看一下回帖也都表示没有问题的！ 但是有一个哥们ID为“阿修罗Axuro “的回帖很具有挑战性，直接导致我中午吃饭消化不良。“说什么10K都很容易完全是不负责任，3K以上就很难连了，大于3K的链接效率就直线下降，各大公司的技术支持我都问过，大于3K的就是难连，楼主可以把你的片段发给那个说10K很容易的让他帮你弄。”“表示完全不信，我连3点几K的时候也是一直连不上，咨询各大公司的技术支持，都说大于3K了效率直线下降，第一次听你说10K的都没多大问题。” 本来是不想继续回复的，别人连不连的上实验做不做出来，管我什么事跟我又有什么关系呢？但看到回帖中“完全是不负责任”“楼主可以把你的片段发给那个说10K很容易的让他帮你弄。”本着我自己对自己说话负责任的态度以及以后能继续在小木虫混下去，我还是想确认一下连接10k以上的片段应该是没有问题的，本想把相关的实验图片都贴上去的，但还是算了，回头这哥们又说我这图片是ps的！ Nothing is impossible,自己没见识过的东西那就多看看书吧，别坐井观天说别人说话不负责任，也请那哥们注意以后自己的说话方式。 祝楼主实验顺利！ |
21楼2011-11-18 12:47:37
2楼2011-11-17 18:06:25
3楼2011-11-17 18:10:05
4楼2011-11-17 18:34:36