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林夕梦

木虫 (文坛精英)

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专业: 代谢性疾病药物药理

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题，基因片段3.7Kb载体7Kb，Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆，要么长出来也是假阳性，小提质粒后酶切片段大小不对额

大片段不好连呢，求高手指教有妙招改进么？？

(转化采用的超级感受态细胞，42度30s)

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许多奇迹，我们相信，才会实现……

1楼 2011-11-17 14:21:26

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林夕梦

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引用回帖:

26楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 16:54:28:
你的酶如果是实验室经常用到的话，酶的问题就可以基本排除。你的转化过程也是你经常成功实验的过程的话也应该没问题。根据你的描述是没长克隆或者是假阳性，我自己感觉的话是不是你的大肠杆菌感受态有问题了呢？ ...

都是实验室常用的，感受态没问题的，前几天做了个2.4kb的都成功啦。