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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题,基因片段3.7Kb载体7Kb,Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆,要么长出来也是假阳性,小提质粒后酶切片段大小不对额
大片段不好连呢,求高手指教有妙招改进么??
(转化采用的超级感受态细胞,42度30s)
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许多奇迹,我们相信,才会实现……
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liuxing5157

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by srlee at 2011-11-18 12:47:37:
刚吃过饭回到实验室打开小木虫看到与我相关的帖子,看了回帖我感到很吃惊,仔仔细细的又把我的回帖看了一遍,并招呼其他师兄弟姐妹再帮我看一下回帖也都表示没有问题的!
但是有一个哥们ID为“阿修罗Axuro “的 ...

完全同意你的看法,我虽然现在才研一,但目前构建的载体不下30个,什么样的片段没有连接过!!!他那句话太不负责任啦!
30楼2011-11-18 22:07:31
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longrna

新虫 (正式写手)

贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?
伟大航线....
2楼2011-11-17 18:06:25
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longrna

新虫 (正式写手)

我们一般4度过夜连接,用NEB的酶
伟大航线....
3楼2011-11-17 18:10:05
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 18:06:25:
贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?

takara的连接酶,16度过夜的
许多奇迹,我们相信,才会实现……
4楼2011-11-17 18:34:36
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