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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建
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steler_ly

铜虫 (正式写手)
我也碰到了这样的现象，一个6K的片段连到T载体上，死活连不进去。

上天保佑！
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41楼2012-02-10 14:04:20
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
楼: Originally posted by 威斯布鲁克 at 2012-02-10 13:43:20:
师姐做了好几次连接都没成，最近在换载体

偶的后来成功了呢，多试试，多改进，加油哈
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许多奇迹，我们相信，才会实现……
42楼2012-02-10 14:57:06
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
楼: Originally posted by steler_ly at 2012-02-10 14:04:20:
我也碰到了这样的现象，一个6K的片段连到T载体上，死活连不进去。

上天保佑！

偶的后来成功了呢，多试试，多改进，加油哈
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许多奇迹，我们相信，才会实现……
43楼2012-02-10 14:57:22
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tupac225

金虫 (正式写手)
连接的实验做了不少，一定要有耐心，同时要有失败的准备，{转化采用的超级感受态细胞，42度30s}，我们的转化都是90s呀，另外阴性对照，阳性对照都得有，不要拍麻烦，这样才不会到头来不知道问题出在哪。
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coasttocoast。
44楼2012-07-06 15:59:53
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
43楼: Originally posted by 林夕梦 at 2012-02-10 14:57:22
偶的后来成功了呢，多试试，多改进，加油哈...

请问楼主你的体系是什么 能否透露一下 我也做大片段连接但最近一直未连上，每次挑取的克隆差不多都是自连，难道要把长得克隆都提质粒鉴定一遍？这样岂不是很浪费
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45楼2013-10-10 15:34:50
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小小萧布

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
37楼: Originally posted by srlee at 2011-11-18 23:01:03
哈哈，谢谢你的支持！连接转化是分子生物学中最基本的操作，小片段确实不用考虑多少因素基本都能连的上，片段稍微大一点，如果不注意实验中的细节问题，连接效率可能直线下降甚至连不上，但很负责任的讲连接10k以上 ...

最近我也在做链接转化，一直搞不定，载体1500，目的片段2500，一直连不上，总会出现大把假阳性的，求指教，小弟万分感激了，
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46楼2013-12-08 10:47:53
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魔鬼大静静

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 天使托 at 2011-11-18 10:28:45
3.7不算太大吧。。。我也连接过3点几的。。。
连接时间长一些，关键还是连接体系和时间的选择上有些不合适。。。
改进一下就OK了。。。

我也在构建载体，目的片段3.4KB载体4.7KB，采用单酶切载体也去磷酸化了，可是长出来200多个单克隆都是假阳性是怎么回事，求大神指教
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47楼2018-04-27 15:36:56
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