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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题，基因片段3.7Kb载体7Kb，Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆，要么长出来也是假阳性，小提质粒后酶切片段大小不对额
大片段不好连呢，求高手指教有妙招改进么？？
(转化采用的超级感受态细胞，42度30s)
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许多奇迹，我们相信，才会实现……
1楼 2011-11-17 14:21:26
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

林夕梦(金币+2): 呵呵，那就ok,感谢大家的热心帮助和探讨哈，我会继续努力的哈 2011-11-19 00:15:02
引用回帖:
30楼: Originally posted by liuxing5157 at 2011-11-18 22:07:31:
完全同意你的看法，我虽然现在才研一，但目前构建的载体不下30个，什么样的片段没有连接过！！！他那句话太不负责任啦！

哈哈，谢谢你的支持！连接转化是分子生物学中最基本的操作，小片段确实不用考虑多少因素基本都能连的上，片段稍微大一点，如果不注意实验中的细节问题，连接效率可能直线下降甚至连不上，但很负责任的讲连接10k以上的片段并不是什么很难的事，因为我们经常可以搞定！对于那哥们的话我只好笑笑而已，早已不放在心上了！
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37楼2011-11-18 23:01:03
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longrna

新虫 (正式写手)
贴上你的连接体系及条件嘛，用哪家公司的酶？
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伟大航线....
2楼2011-11-17 18:06:25
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longrna

新虫 (正式写手)
我们一般4度过夜连接，用NEB的酶
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伟大航线....
3楼2011-11-17 18:10:05
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 18:06:25:
贴上你的连接体系及条件嘛，用哪家公司的酶？

takara的连接酶，16度过夜的
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许多奇迹，我们相信，才会实现……
4楼2011-11-17 18:34:36
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