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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR试剂进行大批量配制分装，却出现了扩增效率低下的结果。
汕头大学海洋科学接受调剂
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q307078056

银虫 (正式写手)

[求助] PCR试剂进行大批量配制分装，却出现了扩增效率低下的结果。 已有1人参与

本人目前在做一个课题，为了保证PCR试剂的稳定，
一次过配制300ml的PCR试剂溶液，放置在4度冰箱保存。

配置好当天进行扩增，效率是很好的，放置了30小时左右，
再进行一次分装扩增，反而扩增效率下降的很明显

这东西降解得有这么快吗？

其中的影响因素主要是怎么回事。
引物的合成是跟 英骏公司负责的
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
1楼 2011-11-03 11:32:09
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lxjwishes

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不要分装，现加才行，要么你就直接去买mixture，加个引物和模板就可以了
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pleasemywings,flymeaway.
2楼2011-11-03 11:37:02
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-11-07 18:35:53
分装后放-20℃应该问题不大，4°的稳定性肯定是没有-20°的好了
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3楼2011-11-03 12:01:37
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q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2011-11-03 12:01:37:
分装后放-20℃应该问题不大，4°的稳定性肯定是没有-20°的好了

主要是只放置了30小时就出现完全扩不出模板的情况，太悲催了···
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-11-03 12:11:44
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by q307078056 at 2011-11-03 12:11:44:
主要是只放置了30小时就出现完全扩不出模板的情况，太悲催了···

重复下试验吧，还有你的反应体系已经加酶了么？酶是热启动的还是普通的taq，在放置四度之前我想你应该做个稳定性试验的
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5楼2011-11-03 13:09:30
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jaiminzhang

新虫 (小有名气)
什么叫稳定性试验？谢谢楼上的
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6楼2011-11-04 09:29:45
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real-gold

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

才30h,扩增效率就降低这么多，不太可能啊。用是哪家的酶？
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7楼2011-11-04 10:49:33
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-11-07 18:36:17
为什么不把别的都配好，用之前加酶和引物呢？一般来说，不加酶之前体系是很稳定的。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
8楼2011-11-04 11:06:55
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-11-07 18:36:32
预混很多，放一段时间没有问题的啦。不要加酶。具体用的时候再加酶和引物。最好-20°保存，虽然大家都说4°保存不影响效果。
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9楼2011-11-05 09:30:43
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lyqifeih

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-11-07 18:36:37
加点稳定剂和防腐剂就可以啊。如PEG。
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刚进入神经生物和电生理
10楼2011-11-05 09:33:47
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