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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR试剂进行大批量配制分装，却出现了扩增效率低下的结果。
汕头大学海洋科学接受调剂
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q307078056

银虫 (正式写手)

[求助] PCR试剂进行大批量配制分装，却出现了扩增效率低下的结果。 已有1人参与

本人目前在做一个课题，为了保证PCR试剂的稳定，
一次过配制300ml的PCR试剂溶液，放置在4度冰箱保存。

配置好当天进行扩增，效率是很好的，放置了30小时左右，
再进行一次分装扩增，反而扩增效率下降的很明显

这东西降解得有这么快吗？

其中的影响因素主要是怎么回事。
引物的合成是跟 英骏公司负责的
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1楼 2011-11-03 11:32:09
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by q307078056 at 2011-11-03 12:11:44:
主要是只放置了30小时就出现完全扩不出模板的情况，太悲催了···

重复下试验吧，还有你的反应体系已经加酶了么？酶是热启动的还是普通的taq，在放置四度之前我想你应该做个稳定性试验的
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5楼2011-11-03 13:09:30
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lxjwishes

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不要分装，现加才行，要么你就直接去买mixture，加个引物和模板就可以了
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pleasemywings,flymeaway.
2楼2011-11-03 11:37:02
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-11-07 18:35:53
分装后放-20℃应该问题不大，4°的稳定性肯定是没有-20°的好了
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3楼2011-11-03 12:01:37
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q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2011-11-03 12:01:37:
分装后放-20℃应该问题不大，4°的稳定性肯定是没有-20°的好了

主要是只放置了30小时就出现完全扩不出模板的情况，太悲催了···
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
4楼2011-11-03 12:11:44
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