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zhjzhou木虫 (著名写手)
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[求助]
克隆大片段的序列如何设计引物
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| 大家好，我现在要克隆几个3000bp左右的基因，现在设计引物，用cDNA序列和CDS序列比对后，有的前面对上，后面不匹配；有的前面不匹配，后面匹配。而且用ATG前面的序列设计引物，没有特异性，这样该怎么设计引物啊？请大虾指点下，谢谢！ |
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yunzhifei
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dog_608582
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！流程说得很清楚了！ 2011-11-02 21:44:35
zhjzhou(金币+3): 谢谢！ 2011-11-03 10:11:28
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！流程说得很清楚了！ 2011-11-02 21:44:35
zhjzhou(金币+3): 谢谢！ 2011-11-03 10:11:28
| 你是要想得到3KB的cDNA 片段吗？如果是，简单的方法是用RACE的方法，先得到一个小片段，然后利用加头加尾的特殊引物把5‘和3’端的序列拿到后，在根据3‘和5’的序列设计特异性引物把全长的cDNA扩增出来。具体你可以查RACE方法。至于先得到小片段，要根据你已有的信息去设计简并引物什么的。祝好运！另外，3KB不大，引物我都克隆过超过8KB的基因。 |
5楼2011-11-02 09:13:06
