24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2833  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR一直扩不出目的条带

各位大虾你们好:我想问一下我最近跑pcr一直扩不出我的目的条带,我退后温度从49度到60度都跑过还是没结果,我的引物合成单上的这对引物其中一条引物的Tm值是52.74,一条Tm值是55.02,我跑pcr的程序是95度2min,94度40s,55度40s,72度40s,循环35个,72度10min,4度保存。我的体系是模板2ul,dntp1ul,引物各1ul,buffer5ul,Taq酶1ul,DDW39ul,共50ul的体系。我的模板是提取的重组质粒!各位高手给小妹指点一下吧!谢谢了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhfge

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先说个体外话:建议你换一个程序哦
你的变性、退火、延伸时间都太长了(300bp的片段延伸就算是高保真酶也只要10s就够了),你的程序太浪费时间了。
1、在做其他的尝试前,建议你先确认你的体系中各成分是否有被污染、有没有失效。
2、如果模板浓度非常高,降低点浓度试试;
3、两条引物的退火温度差异不大,不需要做TouchDown;但是建议你检查一下你的引物匹配程度,有无可能错配;要是都没问题,向引物合成公司投诉,要求重合。(有的时候出现双带甚至多带并不是因为你的引物设计有问题,而是合成公司做纯化、或者分装时压根就把引物给污染)。
9楼2011-10-30 18:24:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主的泳道里有弥散吗?质粒稀释多少倍?
jiayoubashaonian
2楼2011-10-28 22:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

有弥散,隐约能看到拖带现象,另外在700bp还有条带,但是我的条带大小是300bp多,质粒的浓度不没测过!但是提完质粒检测条带可亮!
3楼2011-10-29 15:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙梦婧

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

touch-dowm pcr试一下
努力向前看
4楼2011-10-29 17:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +27 刺痛jk 2026-04-06 28/1400 2026-04-08 16:16 by luoyongfeng
[考研] 一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂 +11 Mr. Z 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:15 by luoyongfeng
[考研] 化学308分求调剂 +18 你好明天你好 2026-04-07 20/1000 2026-04-08 14:51 by screening
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +11 Naiko 2026-04-04 11/550 2026-04-08 14:00 by wutongshun
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +11 努力奋斗112 2026-04-08 11/550 2026-04-08 11:11 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +13 熊二想上岸 2026-04-04 13/650 2026-04-08 10:33 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +28 111623 2026-04-04 33/1650 2026-04-08 09:24 by 泽润东方
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 软工学硕299求调剂 +6 useryy 2026-04-07 6/300 2026-04-07 09:50 by vgtyfty
[考研] 085100建筑学 寻求跨专业调剂 一志愿南大294分 校级省级国家级奖项若干 踏实肯干 +3 1021075758 2026-04-06 4/200 2026-04-07 09:23 by 蓝云思雨
[考研] 285求调剂 +15 哦呦呼o 2026-04-04 17/850 2026-04-06 23:02 by chenzhimin
[考研] 专硕304找调剂,一线城市最好 +3 李lsl李 2026-04-05 3/150 2026-04-06 12:16 by ffffjjjj
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 265求调剂 +17 林深温澜 2026-04-01 20/1000 2026-04-04 01:09 by userper
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 求调剂,一志愿南京师范大学计算机专硕,初试373,六级通过, +3 计算机追梦人 2026-04-01 3/150 2026-04-02 07:57 by fxue1114
信息提示
请填处理意见