24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1015.5
帖子: 41
在线: 19.1小时
虫号: 1127506
注册: 2010-10-20
性别: MM
专业: 兽医传染病学

[求助] PCR一直扩不出目的条带

各位大虾你们好：我想问一下我最近跑pcr一直扩不出我的目的条带，我退后温度从49度到60度都跑过还是没结果，我的引物合成单上的这对引物其中一条引物的Tm值是52.74，一条Tm值是55.02，我跑pcr的程序是95度2min，94度40s，55度40s，72度40s，循环35个，72度10min，4度保存。我的体系是模板2ul，dntp1ul，引物各1ul，buffer5ul，Taq酶1ul,DDW39ul，共50ul的体系。我的模板是提取的重组质粒！各位高手给小妹指点一下吧！谢谢了！

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

PCR技术

分子生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2011-10-28 20:15:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhfge

铜虫 (初入文坛)

MolEPI: 2
应助: 0 (幼儿园)
金币: 147.1
帖子: 20
在线: 8.1小时
虫号: 674583
注册: 2008-12-14
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

首先说个体外话：建议你换一个程序哦
你的变性、退火、延伸时间都太长了（300bp的片段延伸就算是高保真酶也只要10s就够了），你的程序太浪费时间了。
1、在做其他的尝试前，建议你先确认你的体系中各成分是否有被污染、有没有失效。
2、如果模板浓度非常高，降低点浓度试试；
3、两条引物的退火温度差异不大，不需要做TouchDown；但是建议你检查一下你的引物匹配程度，有无可能错配；要是都没问题，向引物合成公司投诉，要求重合。（有的时候出现双带甚至多带并不是因为你的引物设计有问题，而是合成公司做纯化、或者分装时压根就把引物给污染）。