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libc119

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 中几个问题

小弟初做WB ，问几个问题 ：
1、胶凝后，多长时间开始电泳效果好点？
2、目标蛋白有2个一个120 一个50 ，那用多少浓度的分离胶效果好点？
3、为什么我们转膜时，转膜槽基本不热？
4、目标蛋白一个120 一个50  转膜时电压、电流还有时间怎么设定好呢？百乐的机器。
求各位大师帮助下，做了快大半个月的，还没出像样的带子
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1楼 2011-10-27 15:00:04
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
libc119(金币+2): 2011-11-15 14:13:58
西瓜(金币+2): Good 2011-11-29 23:50:08
做好浓缩胶后，现在的室温大概15度左右，我放一个小时
呃，你的10%应该可以吧
转膜时，最好低温
120、50KD的，伯乐的一般200mA恒流，2小时
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2楼2011-11-13 20:20:33
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neon_alone

木虫 (小有名气)
同意楼上，就是转膜时候，你用半干还是湿转呢？时间不一样的
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3楼2011-11-29 19:19:18
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)
室温控制在20摄氏度以上，胶凝半个小时可以上样
150， 50 KDa 用8%的胶比较好
转膜时最好冰浴
湿转100V 一个小时
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4楼2011-11-30 12:14:08
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