| 查看: 3428 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
jyongchao木虫 (正式写手)
|
[求助]
DNA双酶切后在两端加adapter的连接问题
|
||
|
各位高手，最近在做MSAP，要求先将总DNA经EcoR I 和Msp I（或Hpa II）酶切，然后在所有DNA片段两端要加上接头，PCR后跑胶看条带，对其中的连接一步不太懂，想请教几个问题： 1、我的adapters有四个：EcoRI-adapterI、EcoRI-adapter II、H/M-adapterI、H/M-adapter II 都是合成的单链，如果进行连接是不是先要分别将EcoRI-adapterI和EcoRI-adapter II、H/M-adapterI和H/M-adapter II 配对后才能连？怎么配对呢？ 直接56℃退火？ 2、我的T4连接酶是TaKaRa的，说明书上的例子是载体连接，这个连接体系能不能用到我这个上呢？因为包装是350U/ul ，说明书上是加了1ul 过夜16℃反应，感觉酶有点多呀 3、EcoRI-adapter和H/M-adapter的比例、adapter与总DNA量的比例调成多少才能有比较好的连接效率？ 4、连接完成后直接PCR对最后的PCR效果有没有影响？ [ Last edited by jyongchao on 2011-10-16 at 20:57 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？
已经有8人回复
-
极限拉扯，如何抉择
已经有7人回复
-
课题组会帮你通过考核么？
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切问题
已经有15人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
已经有12人回复
- 质粒DNA用EcoR1和HindⅢ双酶切后电泳图，求鉴
已经有6人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 【求助/交流】质粒双酶切连接问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】为什么pUC18和DNA片段经过Eco1和Hind3酶切后无法连接
已经有3人回复
- 【问题反馈】质粒双酶切切下120bp每次都看不到？
已经有21人回复
|
本帖内容被屏蔽 |
7楼2012-08-24 15:44:49
xiaobao261
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 12.1
- 帖子: 2
- 在线: 25分钟
- 虫号: 1490489
- 注册: 2011-11-14
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2011-11-14 10:27:20
水中小妖
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1936.5
- 散金: 1101
- 红花: 3
- 帖子: 209
- 在线: 78.6小时
- 虫号: 1149500
- 注册: 2010-11-17
- 专业: 果树学
3楼2011-11-14 21:21:48
jyongchao
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3952.9
- 帖子: 355
- 在线: 89.8小时
- 虫号: 605483
- 注册: 2008-09-18
- 性别: GG
- 专业: 植物进化生物学
4楼2011-11-26 00:15:43
