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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

[求助] 我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。

我用的是底泥提取出来的DNA,其260/280,260/230达到1.8,1.9的样子,应该还不错。我选用的引物是16SrDNA V3区的通用引物,27F和1495R。PCR条件是参考文献的,采用降落式。为什么电泳图会变成这样呢。自右手边起第一个是Marker,第二个是空白,而且我每次做的空白经常会有条带出现,做了好多次总是不能出现满意的结果,很着急。请各位不吝赐教,先谢谢了。

PCR电泳图
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科研真辛苦!
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asznpb

木虫 (正式写手)

空白有带那肯定是试剂有污染了……胶跑成这样那肯定是电泳体系有问题,marker跑拖尾那就是电泳的问题,没别的原因
显微镜下的世界很精彩!
9楼2011-10-13 16:24:13
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2011-10-13 19:46:12
1,方向反了,一般习惯都是胶孔在上面
2,从你的marker来看,应该是电泳除了问题
建议更换新的电泳液,重新做胶(琼脂糖浓度高一些,胶硬一些),还有就是降低电压重新跑

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

显微镜下的世界很精彩!
2楼2011-10-13 11:04:12
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-13 16:20:59
空白出条带,请问是怎么设置的空白?只有水?还是除了底物之外都加了?如果是后者的话可能是引物二聚体,或者是别的东西有DNA污染了,如果是前者,那就神奇了……
显微镜下的世界很精彩!
3楼2011-10-13 11:06:12
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shrimp5555

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是你的DNA出问题啦?对了,跑胶的时候电压不要太大啊,不然就会出现拖尾的
大大傻气加上少少耍流氓
4楼2011-10-13 11:09:57
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