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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

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[求助] 我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。

我用的是底泥提取出来的DNA，其260/280,260/230达到1.8,1.9的样子，应该还不错。我选用的引物是16SrDNA V3区的通用引物，27F和1495R。PCR条件是参考文献的，采用降落式。为什么电泳图会变成这样呢。自右手边起第一个是Marker，第二个是空白，而且我每次做的空白经常会有条带出现，做了好多次总是不能出现满意的结果，很着急。请各位不吝赐教，先谢谢了。

PCR电泳图

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科研真辛苦！

1楼 2011-10-13 10:26:23

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xbl3688

银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-13 16:20:24

1、连Marker一并出现抹带一般都是电泳的问题，一种可能是电泳液用久了，里边有杂质，建议更换；另一种可能是胶没凝好，配胶时误用水（应用1x TAE）溶解琼脂糖也会出现模糊和抹带；电压稍大没很大关系的，偶尔赶时间130V我都跑过；
2、这图反着看起来真不舒服，你说几次的空白都有条带可能是哪个试剂污染了，或者体系配置有问题。一步一步检查吧。