24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3013  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

王玉民

新虫 (小有名气)

[求助] 求助:请问做TOPO克隆时总是连接不上怎么回事啊?

请教高手:
我用Pfu酶扩增得到大约500bp的片段,与TOPO载体连接时,连接转化后总是不长斑是怎么回事啊?
有没有做过TOPO克隆的有什么好的经验指导一下啊?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

心晴
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoshu8833

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-10-11 07:47:04:
TOPO vector 是invitrogen公司的一个TA克隆的质粒载体系列。http://tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/topota_man.pdf
Pfu酶是高保真酶,扩增后不带A的,所以你扩增得到大约500bp的片段如果 ...

这个答案靠谱~~要自己加一步的~~
PS:你扩增的片段纯化回收的方法也可能对后面的连接有影响~~
Boncourage
6楼2011-10-11 17:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助发帖! 2011-10-11 21:56:13
1.涂板:玻璃棒温度过高或离酒精灯太近被烧死了:或者涂板时液体没涂干
2.确定目的基因是否连接上了载体
3.检验一下你的扩增片段
4.考虑是不是培养基的问题
2楼2011-10-11 09:58:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王玉民

新虫 (小有名气)

多谢!再请问1.如何确定是否连接上了载体?
2.如何检测扩增片段是否正确,大小用琼脂糖检测的是正确的,末端如何检测呢?
3.连接产物和感受态的比例多少最合适呢?
心晴
3楼2011-10-11 10:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

不会是感受态效率不高所致吧?
在等待中涅槃重生
4楼2011-10-11 14:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +4 荷包蛋hyj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 00:39 by wxiongid
[考研] 286求调剂 +5 PolarBear11 2026-03-26 5/250 2026-03-26 23:59 by 运气yunqi
[考研] 304材料求调剂 +3 钟llll 2026-03-26 3/150 2026-03-26 23:05 by Dyhoer
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 材料与化工考研调剂 +10 孅華 2026-03-22 10/500 2026-03-26 15:40 by zzll406
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
信息提示
请填处理意见