应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：请问做TOPO克隆时总是连接不上怎么回事啊？
51/1返回列表
查看: 2986  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

王玉民

新虫 (小有名气)

[求助] 求助：请问做TOPO克隆时总是连接不上怎么回事啊？

请教高手：
我用Pfu酶扩增得到大约500bp的片段，与TOPO载体连接时，连接转化后总是不长斑是怎么回事啊？
有没有做过TOPO克隆的有什么好的经验指导一下啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
心晴
1楼 2011-10-11 09:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王玉民

新虫 (小有名气)
多谢！再请问1.如何确定是否连接上了载体？
2.如何检测扩增片段是否正确，大小用琼脂糖检测的是正确的，末端如何检测呢？
3.连接产物和感受态的比例多少最合适呢？
赞一下 回复此楼
心晴
3楼2011-10-11 10:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助发帖！ 2011-10-11 21:56:13
1.涂板：玻璃棒温度过高或离酒精灯太近被烧死了：或者涂板时液体没涂干
2.确定目的基因是否连接上了载体
3.检验一下你的扩增片段
4.考虑是不是培养基的问题
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-10-11 09:58:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

不会是感受态效率不高所致吧？
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
4楼2011-10-11 14:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by 王玉民 at 2011-10-11 09:25:09:
请教高手：
我用Pfu酶扩增得到大约500bp的片段，与TOPO载体连接时，连接转化后总是不长斑是怎么回事啊？
有没有做过TOPO克隆的有什么好的经验指导一下啊？

TOPO vector 是invitrogen公司的一个TA克隆的质粒载体系列。http://tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/topota_man.pdf
Pfu酶是高保真酶，扩增后不带A的，所以你扩增得到大约500bp的片段如果没有经过加A处理，是不能直接用于TOPO vector做TA克隆的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-10-11 14:47:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +7 陌の森林 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:10 by 功夫疯狂
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +4 蔡大美女 2026-03-13 4/200 2026-03-18 22:47 by walc
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭