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whuthefen

新虫 (初入文坛)

[求助] 基于氨基酸的系统发育树的构建

大家好。我最近构建系统发育树,我通过PCR扩增到功能基因片段,功能基因片段通过NCBI上面的blastx检索到最相似的氨基酸序列,然后构建氨基酸序列系统发育树。我的问题是:首先,这样做对吗?其次,同一个DNA序列,我通过BLASTn和BLASTx检索,发现BLASTn检索最相似的DNA序列和Blastx检索出最相似的氨基酸序列不是同一个片段,这就意味着基于氨基酸的系统发育树不能反映基于DNA的系统发育树?而什么时候选基于氨基酸的系统发育树,什么时候选基于DNA的系统发育树呢?我觉得,应该是看自己论文的需要,如果论文想反应DNA序列的遗传适应性,应该选基于DNA的系统发育树,如果倾向于功能分析,选择基于氨基酸的系统发育树。但是,这两个都可以反应同源关系吧,因为系统发育树基于相似性构建的,相似性大意味着可能是同源的。最后,我还有一个问题,如果要证明两个序列是同源的,如何证明呢?
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2223822楼: Originally posted by whuthefen at 2011-10-07 12:40:00
大家好。我最近构建系统发育树,我通过PCR扩增到功能基因片段,功能基因片段通过NCBI上面的blastx检索到最相似的氨基酸序列,然后构建氨基酸序列系统发育树。我的问题是:首先,这样做对吗?其次,同一个DNA序列,我 ...

① DNA与氨基酸不同一个片段,这才是正常的或者一般是正常的,毕竟编译过程(密码子→氨基酸)不是一一对应的,一种氨基酸可以有几种密码子来编码;
② 所以二者并不矛盾,可能数据库里面的信息本身还不够多,也许DNA的信息已经很丰富,你对比一下就可以找到与你序列非常接近的种,但是可能氨基酸的很少人把序列提交数据库,你比对就未必能够很精确地确定它的种,所以二者不一定会相符;
③ 判断你的菌属于什么种属,最好用16S rDNA,不要选用氨基酸,前面①说过为什么了,也就是说氨基酸是相对不“保守”的。如果你要分析蛋白质的功能等,那就一定要用氨基酸了,这时就去数据库比对相关的氨基酸序列。但是氨基酸序列只能用于判断蛋白质一二三级结构等模糊信息,不能像DNA那么精确。
④ 二者基本都可以反映同源关系,一般定到属是肯定没有问题的,而且不管是DNA还是氨基酸,你做出来的进化树跟某个序列很相似,你不能就说是它,只是说很接近,是不是它还需要做很多的分子鉴定工作。这时你只能给你的菌株单独命名,这个是特殊的,不管与其他序列多相似,都是独一无二的。同源性只是相对的,所以二者都可以反应问题;
⑤ 你最后一个问题没说明白,两个序列是,是什么东西?氨基酸与你的DNA还是?
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
7楼2012-06-14 10:36:04
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