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bonbonzd

木虫 (小有名气)

[求助] pUC18和pBR322质粒的装载量分别是多少？

各位虫友，pUC18和pBR322质粒的装载量（可插入外源片段的大小）分别是多少？
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1楼 2011-10-05 20:05:27
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
朢有经验的大侠指导一下！
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2楼2011-10-06 18:50:25
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
zhang8826857(金币+2): 鼓励积极回帖 2011-10-06 22:56:37
pBR322，4363bp；
pUC18/19是由pBR322改造来的，2.69kb，所以按照质粒载体的大小上限来说，pUC应该比pBR322装载量大1.5kb左右吧
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显微镜下的世界很精彩！
3楼2011-10-06 22:49:41
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-10-07 07:22:47
pBR322克隆6kb大小的外源DNA片段还是问题不大的，加上他本身的4.4kb，差不多质粒载体的最佳大小也就是10左右吧……再高不过15kb，一般来说质粒超过20kb就基本不能整合进去了，按照这样的标准你算一下就是了呗
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bonbonzd
显微镜下的世界很精彩！
4楼2011-10-06 23:05:07
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-06 23:05:07:
pBR322克隆6kb大小的外源DNA片段还是问题不大的，加上他本身的4.4kb，差不多质粒载体的最佳大小也就是10左右吧……再高不过15kb，一般来说质粒超过20kb就基本不能整合进去了，按照这样的标准你算一下就是了呗

谢谢你的回复，我的目的片段4kb，但是我也听过一种说法就是外源片段太大了在连接的时候不好连接，还有就是外源片段太大了会不会迫使质粒的双螺旋改变？
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5楼2011-10-06 23:16:29
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-10-07 07:22:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by bonbonzd at 2011-10-06 23:16:29:
谢谢你的回复，我的目的片段4kb，但是我也听过一种说法就是外源片段太大了在连接的时候不好连接，还有就是外源片段太大了会不会迫使质粒的双螺旋改变？

那样的话两个都行了，你随便选个用着合适的，不放心的话你还是用pUC18/19呗……双螺旋改变倒还不至于，因为酶切的缘故螺旋的改变是肯定的，连接上之后就没大问题了……其实现在用pBR322已经很少了吧，大多数都是以他为基础改良的……
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显微镜下的世界很精彩！
6楼2011-10-06 23:20:28
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ben1147

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流^_^ 2011-10-08 15:28:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by bonbonzd at 2011-10-06 23:16:29:
谢谢你的回复，我的目的片段4kb，但是我也听过一种说法就是外源片段太大了在连接的时候不好连接，还有就是外源片段太大了会不会迫使质粒的双螺旋改变？

外源片段太大不会导致质粒本身有什么问题，几百K甚至上M的质粒自然界里也不是没有。问题在于作为克隆载体使用的质粒本身拷贝数很高，如果质粒过大，质粒在宿主细胞内的稳定性，质粒复制分离的完整性等等可能会受到影响。如果外源片段很大，建议使用以拷贝数低一点的复制起点为骨架构建的克隆载体，以及适合大质粒扩增的宿主菌
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7楼2011-10-08 15:09:13
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jjsh310

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ben1147 at 2011-10-08 15:09:13
外源片段太大不会导致质粒本身有什么问题，几百K甚至上M的质粒自然界里也不是没有。问题在于作为克隆载体使用的质粒本身拷贝数很高，如果质粒过大，质粒在宿主细胞内的稳定性，质粒复制分离的完整性等等可能会受到 ...

我也一直在用pUC19连6.4k的片段，每次都连不上，我也在考虑是不是装载量的问题，发现片段缺失了一段。。。。是不是质粒复制过程中不稳定啦。
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初来乍到··
8楼2015-03-17 13:18:42
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澍上莓果儿

禁虫
本帖内容被屏蔽
9楼2022-07-04 11:02:27
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