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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 请教
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

[交流] western blot 请教

现在要做PLK1蛋白，为66KD，立春红染膜后能看到条带，但是发光的时候是白板，这是为什么！
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1楼 2011-09-28 17:32:36
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+3): 恩，好建议。任何时候对照试验都是非常有价值的。 2011-09-29 13:33:57
睡着数绵羊(金币+1): 嗯，是哦，谢谢！ 2011-09-30 10:10:24
染色只能说明你的目的蛋白已成功转到膜上了，但是WB后面还需要封闭，一抗，二抗，所以有可能是你后面出问题了，建议楼主做WB时候一定要选择好的阳线质控，确保以后的试验没有问题。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-09-29 10:46:55
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lubuddy

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
睡着数绵羊(金币+1): 非常感谢！ 2011-09-29 10:38:33
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-29 13:33:19
你是纯化的蛋白么，怎么肯定66kd处就是你的目的蛋白呢？

一抗、二抗都没问题吧？做实验出错的时候需要足够多的阳性和阴性对照才好说明问题吧。你增加对照确保一抗和二抗都完好试试看。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-09-28 20:25:58
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
抗体是能说明问题的     还是不要用丽春红吧
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3楼2011-09-29 08:26:06
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lubuddy at 2011-09-28 20:25:58:
你是纯化的蛋白么，怎么肯定66kd处就是你的目的蛋白呢？

一抗、二抗都没问题吧？做实验出错的时候需要足够多的阳性和阴性对照才好说明问题吧。你增加对照确保一抗和二抗都完好试试看。

我做的是PLK1蛋白，不是纯化的，大小为66KD。在加个确保会出的样品看看。
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4楼2011-09-29 10:38:08
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