| 查看: 8556 | 回复: 80 | |||
| 【奖励】 本帖被评价71次，作者xjtuwgz增加金币 54.8 个 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[资源]
【资料】植物总蛋白提取方法
|
|||
|
一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）： 1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质 花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度 2个小时(必要时过夜)，4度 25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度 1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。 2．苯酚（phenol）提取法 花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。将样本转移至离心管中，4度 震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。 3．直接IEF buffer提取蛋白质 直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。 4．Tris-HCL缓冲液法 花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，加入Tris-HCL缓冲液（50mm,8.8,Tris-HCL, 5mmEDTA,20mmDTT,100mmKCL,2mmPMSF）,在融化后，混合液在4度放30min, 25000g离心20min,收集上清，对沉淀重新提取一次，将收集到的上清混合，用5倍体积的100%丙酮沉淀蛋白质，-20度孵育2h,离心后，用80%的丙酮洗剂沉淀2次，IEF buffer重悬沉淀，方法如1 5．利用Bradford试剂法估测提取的总蛋白浓度，并调整浓度行蛋白电泳，-80度保存。 本人翻译的，具体方法流程见附件原文。[ Last edited by xjtuwgz on 2011-9-28 at 17:24 ] · [ Last edited by silicare on 2012-11-6 at 07:52 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 叶蛋白 |
» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 肌原纤维蛋白你们是如何提取的？
已经有8人回复
- 请问有没有可以帮忙提取植物蛋白的公司？
已经有5人回复
- 关于TCA法沉淀蛋白质。。是要怎么操作的呢？
已经有11人回复
- 植物中的总蛋白与可溶性蛋白
已经有3人回复
- 植物蛋白提取温度一般为多少
已经有3人回复
- 请教提取拟南芥叶片总蛋白SDS-PAGE时较亮的条带对应的蛋白？
已经有29人回复
- 细胞碎片中蛋白的提取测定方法
已经有7人回复
- 抽提组织中蛋白质的步骤
已经有4人回复
- 提取植物叶片中蛋白质的方法，希望能有详细的参考步骤
已经有8人回复
- 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
已经有4人回复
- 求适合western bloting的提取植物组织蛋白提取方法
已经有12人回复
- 提取灵芝蛋白如何去色素
已经有6人回复
- 提取DNA的过程中如何有效的除去蛋白质
已经有7人回复
- 植物总蛋白提取方法的问题
已经有3人回复
- 膜蛋白提取问题！
已经有8人回复
- 提出来的植物蛋白怎么有点发黑啊，是什么原因呢
已经有6人回复
- 【求助】蛋白提取
已经有6人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
- 【分享】高人整理的细胞总蛋白的提取
已经有17人回复
- 【求助/交流】植物蛋白提取方法讨论
已经有14人回复
4楼2011-09-28 17:26:30
2楼2011-09-28 13:16:28
★★★★★ 五星级,优秀推荐
|
顶下！ 谢谢共享！ 我这也有一些此类实验方法的总结经验啥的！ http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4197411&fpage=1 这里我帖子里面推荐的这个实验方法网站就挺不错，也推荐给楼主！ |
14楼2012-03-04 17:04:30
简单回复
2011-12-18 21:45
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
2011-12-18 21:49
回复
顶一下，感谢分享！
2011-12-18 22:22
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
周世龙10楼
2012-02-15 08:36
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
starking52112楼
2012-03-04 16:24
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
starking52113楼
2012-03-04 16:24
回复
顶一下，感谢分享！
