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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取DNA稀释太稀了怎么办
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

[求助] 提取DNA稀释太稀了怎么办

我提取的DNA用TE稀释的，用了600ul,本来只需要150ul的，可是记错了，感觉太稀的话电泳跑出来的条带就不够量，请问有谁知道如何补救呢？
    还有一个问题就是我电泳跑出来的条带泳道内都呈现白色的长长拖带，是为什么呢，覆盖了全部泳道的。
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科研真辛苦！
1楼 2011-09-27 17:49:28
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-28 07:24:03
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2楼2011-09-27 18:05:41
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
树宝宝zyx(金币+5): 2011-09-27 20:08:57
dhd997(金币+3): good 2011-09-28 07:24:16
1，你需要用酚仿重新抽提除蛋白质，或者用DNA回收KIT处理一下
2，如果浓缩的话，要么你用KIT重新吸附和溶解，要么用乙醇沉淀，都可以浓缩

3，先确定你用来做什么的，实验目的要清晰，很多处理确实不是那么重要
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致良知
3楼2011-09-27 19:10:55
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by facingworld at 2011-09-27 18:05:41:
拖带的话是蛋白质没有除尽，你可以浓缩一下哈，不过我没有做过，不知道效果怎么样，前天世界在哪儿浓缩了

恩，浓缩的话是因为我想条带跑得好一点，用来写文章的时候放上去的，因为被我稀释太多所以感觉条带有点淡。不知道是不是这个原因。还有那个蛋白质的问题，我测出来的260/230达到1.8，感觉以前的没达到这个数的也没有这样的。不知道加样和跑条带染色这些步骤会不会对结果也有影响呢。我平时都是加10ul提取液1ul上样缓冲液，60V跑1个小时多点，EB染色10min。
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科研真辛苦！
4楼2011-09-27 20:14:28
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-09-27 19:10:55:
1，你需要用酚仿重新抽提除蛋白质，或者用DNA回收KIT处理一下
2，如果浓缩的话，要么你用KIT重新吸附和溶解，要么用乙醇沉淀，都可以浓缩

3，先确定你用来做什么的，实验目的要清晰，很多处理确实不是那么重要

恩，浓缩的话是因为我想条带跑得好一点，用来写文章的时候放上去的，因为被我稀释太多所以感觉条带有点淡。不知道是不是这个原因。还有那个蛋白质的问题，我测出来的260/230达到1.8，感觉以前的没达到这个数的也没有这样的。不知道加样和跑条带染色这些步骤会不会对结果也有影响呢。我平时都是加10ul提取液1ul上样缓冲液，60V跑1个小时多点，EB染色10min。
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科研真辛苦！
5楼2011-09-27 20:15:43
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-28 07:24:26
如果你仅仅是为了跑个好看的胶的话，你可以重新配置胶，更换缓冲液，loading buffer多加点儿是不要紧的，然后慢慢跑，呵呵

不过如果你有smear的背景的话，要么你有蛋白质污染，要么你还有残留的RNA，这方面可能你都要处理，先加点儿RNase, 然后再用酚仿抽一下就好了
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致良知
6楼2011-09-27 21:33:46
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他她0328

银虫 (小有名气)
浓缩的话可以加无水乙醇重新沉淀，然后再加入TE溶解就好了，我之前也做过浓缩。
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7楼2011-10-09 13:52:12
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 旋转蒸发仪有用过，效果不错的。 2011-10-09 15:30:20
有种机器叫旋转蒸发浓缩仪可以试一下，一两个小时就能把400ul浓缩到150ul左右……这种仪器应该很常见，长得跟离心机似地
还有就是你的拖带太厉害显然有RNA没出干净，加点RNA酶4摄氏度过夜或者直接把RNA酶加到ep管里面-20℃保存即可
至于重新抽提沉淀，如果样品很珍贵的话还是算了吧，这样损失很大的，如果样品量很大，还是建议重新抽提沉淀一次
ps：如果是蛋白质没出干净的话应该是胶孔很亮而不是条带拖尾，因为蛋白质因为分子量的原因在琼脂糖凝胶里面是没法进入凝胶的
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显微镜下的世界很精彩！
8楼2011-10-09 13:58:35
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)
用酚氯仿抽提后，溶解时再缩小体积就可以了。
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9楼2011-10-09 14:06:09
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-10-09 22:58:12
浓缩DNA不难，最简单的是加像碱裂解法手工提质粒那样，加2倍体积的无水乙醇或者1倍体积的异丙醇，室温放上10分钟（在冰上效果更好，直接放4度冰箱也行），然后12,000rpm离心5分钟就沉淀下来了（可以看到白色沉淀块）。敞开管口放上几分钟让乙醇挥发掉，再溶解即可。
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10楼2011-10-09 22:20:54
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