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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 16S 跑不出来 求帮助
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hnhn66

铁虫 (初入文坛)

[求助] 16S 跑不出来 求帮助

我用试剂盒提取水体中的总DNA ，浓度大约在100左右。跑胶的时候条带也很亮。利用总DNA 作为模板，跑16S  PCR ，最后跑胶的时候没有条带。引物换了 好几个 都不行。

PCR 条件：
95℃   3min

95℃   1min
48℃   1min
72℃   2min
（30循环）

72℃  2nin
4℃
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1楼 2011-09-22 15:55:51
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助。 2011-09-22 19:54:50
本帖内容被屏蔽
2楼2011-09-22 16:11:59
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hnhn66

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by healerly at 2011-09-22 16:11:59:
1.模板加多少啊？模板太多的话会造成P不出来。。。
2.退火温度高嘛？
3.确定体系木有问题？

加的1 υl  的模板量
我用的体系都是以前师姐用过的（她和我一样也是提取水体中的总DNA），没有问题。 反应条件也是用她的。
赞一下 回复此楼
3楼2011-09-22 16:54:39
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 欢迎交流经验 2011-09-26 13:12:05
本帖内容被屏蔽
4楼2011-09-23 15:05:31
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-26 18:19:06
本帖内容被屏蔽
5楼2011-09-24 15:35:23
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天鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 确实可以考虑稀释模板 2011-09-26 13:12:36
你还可以2次PCR试一下，有同学还说稀释模板PCR还是很有效果的
你看看了
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快乐生活，我快乐
6楼2011-09-26 11:29:22
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

你的水中不会只有真菌没有细菌吧
赞一下 回复此楼
一直向前！
7楼2011-09-26 15:34:20
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