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hnhn66

铁虫 (初入文坛)

[求助] 16S 跑不出来 求帮助

我用试剂盒提取水体中的总DNA ,浓度大约在100左右。跑胶的时候条带也很亮。利用总DNA 作为模板,跑16S  PCR ,最后跑胶的时候没有条带。引物换了 好几个 都不行。

PCR 条件:
95℃   3min

95℃   1min
48℃   1min
72℃   2min
(30循环)

72℃  2nin
4℃
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healerly

禁虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助。 2011-09-22 19:54:50
本帖内容被屏蔽

2楼2011-09-22 16:11:59
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hnhn66

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by healerly at 2011-09-22 16:11:59:
1.模板加多少啊?模板太多的话会造成P不出来。。。
2.退火温度高嘛?
3.确定体系木有问题?

加的1 υl  的模板量
我用的体系都是以前师姐用过的(她和我一样也是提取水体中的总DNA),没有问题。 反应条件也是用她的。
3楼2011-09-22 16:54:39
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zmw_520

禁虫 (小有名气)


西瓜(金币+1): 欢迎交流经验 2011-09-26 13:12:05
本帖内容被屏蔽

4楼2011-09-23 15:05:31
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healerly

禁虫 (小有名气)

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-26 18:19:06
本帖内容被屏蔽

5楼2011-09-24 15:35:23
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天鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 确实可以考虑稀释模板 2011-09-26 13:12:36
你还可以2次PCR试一下,有同学还说稀释模板PCR还是很有效果的
你看看了
快乐生活,我快乐
6楼2011-09-26 11:29:22
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

你的水中不会只有真菌没有细菌吧
一直向前!
7楼2011-09-26 15:34:20
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