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关于细胞克隆形成实验基本操作的一些问题，请各位不吝赐教已有1人参与
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本人最近在做肿瘤细胞（贴壁细胞）的克隆形成实验，参考了一些文献，也拟定了初步的实验方法，如下： 1.吹打细胞使完全分散成单个细胞； 2.台盼蓝染色，0.4%台盼蓝与细胞液1:9，计数活细胞数； 3.接种细胞，密度分别为1000个/瓶，500个/瓶，100个/瓶，25cm2的培养瓶； 4.放入培养箱进行培养观察，8-12d左右取出，75%乙醇固定，结晶紫染色，计数大于50个的细胞克隆数。 但实际操作中有几个问题一直很困惑： 1.第三步中接种细胞时大家是怎么稀释细胞的，我接种到100个/瓶的细胞数目时，接种后在显微镜下基本观察不到细胞，一两天后观察基本无贴壁细胞，漂浮的死细胞也很少，1000个/瓶的细胞贴壁率也蛮低的； 2.结晶紫染色的时候大家是染色多长时间的，还有就是染色时大家的结晶紫加的量是多少？我用乙醇固定后加入结晶紫染色30min左右，感觉整个克隆的细胞集落都被染成黑呼呼地一片了，不好计数细胞克隆数。 由于这个实验以前没有做过，现在感觉就是一个人在瞎摸索，看文献只是有大概的实验步骤，具体的操作啥的也不是太清楚，各位如果有这方面的经验请不吝赐教~ |
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 细胞实验操作 |
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