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donnafeng

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[求助] 怎么提高诱导表达的目的蛋白含量

BL21诱导表达的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8时添加IPTG 浓度0.1mM 28度诱导6h）请教提高表达的方法
1 IPTG到底什么时候添加有人说能摇到的最高OD值（大约2.0）一半时添加（即1.0）有的说0.5的时候添加到底应该选择什么时候添加为什么
2 诱导表达时通气量高是有利于大肠杆菌的生长还是有利于蛋白表达应不应该怎么通气量来提高目的蛋白表达
3 有的说缩短诱导表达时间到2~3h好有的说低温长时间诱导表达好到底应该怎么选才能提高表达量

[ Last edited by donnafeng on 2011-9-19 at 14:47 ]

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1楼 2011-09-19 14:46:30

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li1977li

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金币+5): 谢谢 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金币+1): 鼓励分享！ 2011-09-20 11:45:19

引用回帖:

1楼: Originally posted by donnafeng at 2011-09-19 14:46:30:
BL21诱导表达的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8时添加IPTG 浓度0.1mM 28度诱导6h）请教提高表达的方法
1 IPTG到底什么时候添加有人说能摇到的最高OD值（大约2.0）一半时添加（即1.0）有的说0.5的时候添加到底应该选 ...

1、我们实验室一般在OD为0.6左右加IPTG，这个时期是细菌的对数生长期。（但有一次我在OD=1.0时加表达出的蛋白没看到影响）
2、溶氧量我们一般都不考虑，就在500ml的烧瓶中装200ml的LB诱导。
3、一般采取25—30度诱导，IPTG在0.1—0.4mM左右，低温诱导表达可溶性蛋白可能相对较多，而目的蛋白总量可能会减少，这要根据不同需要，需要摸索不同条件才能找到最大表达量。

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4楼2011-09-19 16:09:44

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wlt728

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【答案】应助回帖

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dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金币+3): 对数生长末期还是中期? 大肠杆菌B21是耗氧的减少装液量增加转数不是可以增加溶氧吗 2011-09-20 08:05:04

1:应该在对数生长期是诱导，此时菌体生长快速，也能合成更多的目的蛋白。所以你可以做一个生长曲线的实验。2：要是用三角瓶小试的话，你也没法增加通气量啊，如果你的菌是耗氧菌，溶氧过低是会抑制细菌生长的。如果你的目的蛋白是包涵体，可以试试低温诱导，如果不是，一般37℃诱导4h左右就差不多了。我诱导的时候，IPTG终浓度为0.1mM，高浓度IPTG是会抑制菌体生长的！

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