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donnafeng金虫 (小有名气)
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[求助]
怎么提高诱导表达的目的蛋白含量
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BL21诱导表达的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8时添加IPTG 浓度0.1mM 28度诱导6h） 请教提高表达的方法 1 IPTG到底什么时候添加 有人说能摇到的最高OD值（大约2.0）一半时添加（即1.0） 有的说0.5的时候添加 到底应该选择什么时候添加 为什么 2 诱导表达时通气量高是有利于大肠杆菌的生长还是有利于蛋白表达 应不应该怎么通气量来提高目的蛋白表达 3 有的说缩短诱导表达时间到2~3h好 有的说低温长时间诱导表达好 到底应该怎么选才能提高表达量  [ Last edited by donnafeng on 2011-9-19 at 14:47 ] |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金币+5): 谢谢 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金币+1): 鼓励分享！ 2011-09-20 11:45:19
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金币+5): 谢谢 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金币+1): 鼓励分享！ 2011-09-20 11:45:19
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1、我们实验室一般在OD为0.6左右加IPTG，这个时期是细菌的对数生长期。（但有一次我在OD=1.0时加表达出的蛋白没看到影响） 2、溶氧量我们一般都不考虑，就在500ml的烧瓶中装200ml的LB诱导。 3、一般采取25—30度诱导，IPTG在0.1—0.4mM左右，低温诱导表达可溶性蛋白可能相对较多，而目的蛋白总量可能会减少，这要根据不同需要，需要摸索不同条件才能找到最大表达量。 |
4楼2011-09-19 16:09:44
wlt728
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【答案】应助回帖
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dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金币+3): 对数生长末期还是中期? 大肠杆菌B21是耗氧的 减少装液量增加转数不是可以增加溶氧吗 2011-09-20 08:05:04
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金币+3): 对数生长末期还是中期? 大肠杆菌B21是耗氧的 减少装液量增加转数不是可以增加溶氧吗 2011-09-20 08:05:04
| 1:应该在对数生长期是诱导，此时菌体生长快速，也能合成更多的目的蛋白。所以你可以做一个生长曲线的实验。2：要是用三角瓶小试的话，你也没法增加通气量啊，如果你的菌是耗氧菌，溶氧过低是会抑制细菌生长的。如果你的目的蛋白是包涵体，可以试试低温诱导，如果不是，一般37℃诱导4h左右就差不多了。我诱导的时候，IPTG终浓度为0.1mM，高浓度IPTG是会抑制菌体生长的！ |
2楼2011-09-19 15:02:41
lijunqing525
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donnafeng
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