应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么提高诱导表达的目的蛋白含量
151/2返回列表12下一页
查看: 5100  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

donnafeng

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么提高诱导表达的目的蛋白含量

BL21诱导表达的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8时添加IPTG 浓度0.1mM 28度诱导6h） 请教提高表达的方法
1 IPTG到底什么时候添加 有人说能摇到的最高OD值（大约2.0）一半时添加（即1.0） 有的说0.5的时候添加 到底应该选择什么时候添加 为什么
2 诱导表达时通气量高是有利于大肠杆菌的生长还是有利于蛋白表达  应不应该怎么通气量来提高目的蛋白表达
3 有的说缩短诱导表达时间到2~3h好  有的说低温长时间诱导表达好   到底应该怎么选才能提高表达量


[ Last edited by donnafeng on 2011-9-19 at 14:47 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-19 14:46:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

li1977li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金币+5): 谢谢 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金币+1): 鼓励分享！ 2011-09-20 11:45:19
引用回帖:
1楼: Originally posted by donnafeng at 2011-09-19 14:46:30:
BL21诱导表达的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8时添加IPTG 浓度0.1mM 28度诱导6h） 请教提高表达的方法
1 IPTG到底什么时候添加 有人说能摇到的最高OD值（大约2.0）一半时添加（即1.0） 有的说0.5的时候添加 到底应该选 ...

1、我们实验室一般在OD为0.6左右加IPTG，这个时期是细菌的对数生长期。（但有一次我在OD=1.0时加表达出的蛋白没看到影响）
2、溶氧量我们一般都不考虑，就在500ml的烧瓶中装200ml的LB诱导。
3、一般采取25—30度诱导，IPTG在0.1—0.4mM左右，低温诱导表达可溶性蛋白可能相对较多，而目的蛋白总量可能会减少，这要根据不同需要，需要摸索不同条件才能找到最大表达量。
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2011-09-19 16:09:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金币+3): 对数生长末期还是中期? 大肠杆菌B21是耗氧的 减少装液量增加转数不是可以增加溶氧吗 2011-09-20 08:05:04
1:应该在对数生长期是诱导，此时菌体生长快速，也能合成更多的目的蛋白。所以你可以做一个生长曲线的实验。2：要是用三角瓶小试的话，你也没法增加通气量啊，如果你的菌是耗氧菌，溶氧过低是会抑制细菌生长的。如果你的目的蛋白是包涵体，可以试试低温诱导，如果不是，一般37℃诱导4h左右就差不多了。我诱导的时候，IPTG终浓度为0.1mM，高浓度IPTG是会抑制菌体生长的！
赞一下(1人) 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
2楼2011-09-19 15:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijunqing525

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

donnafeng(金币+1): 没加maker 最粗的那条就是目的 2011-09-20 08:05:51
请问楼主，1、你的MARKER在哪里？2、最粗的那条带是否是你的目的带？
赞一下 回复此楼
宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，看天外云卷云舒。
3楼2011-09-19 15:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

donnafeng

金虫 (小有名气)
ph值 溶氧等条件有利于细菌生长是不是就有利于目的蛋白表达啊 有谁能说说两者的关系啊
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-20 08:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunye
6楼2011-09-20 08:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

donnafeng(金币+5): 谢谢 为什么要选生长旺盛的时候加？ 2011-09-20 11:01:03
引用回帖:
1楼: Originally posted by donnafeng at 2011-09-19 14:46:30:
BL21诱导表达的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8时添加IPTG 浓度0.1mM 28度诱导6h） 请教提高表达的方法
1 IPTG到底什么时候添加 有人说能摇到的最高OD值（大约2.0）一半时添加（即1.0） 有的说0.5的时候添加 到底应该选 ...

一般都是在对数生长前期，此时细菌生长旺盛。减少装液量也不能增加溶氧，提高转速可以增加，如果你是三角瓶培养的话，最好买有挡板的那种。
赞一下 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
7楼2011-09-20 09:46:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

donnafeng(金币+16): 嗯 这下明白了 谢谢 2011-09-20 13:56:39
生长旺盛的时候，细菌的活力强，生长快，自身增值的同时，合成蛋白的速率也快！
赞一下 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
8楼2011-09-20 13:00:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 17:21:51
引用回帖:
8楼: Originally posted by wlt728 at 2011-09-20 13:00:34:
生长旺盛的时候，细菌的活力强，生长快，自身增值的同时，合成蛋白的速率也快！

纠正一下，事实上在对数期诱导，并不只是因为对数期生长旺盛，而是因为一方面对数期时菌已经能很快长到较高浓度，更重要的是培养液内的营养物质还比较充足。
>>如果对发酵液进行补料，即使是平台期也是可以诱导的。关于这个我们系之前有个老师特地做过实验。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-09-20 15:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣
来学习一下，我认为对楼中后期较好，当然在平台期诱导是可以表达的，我也做过。
赞一下 回复此楼
dasheng1980
10楼2011-10-23 15:38:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 donnafeng 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +4 炎黄贵胄 2026-08-22 5/250 2026-08-24 02:09 by 流流伤
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭