| 查看: 4577 | 回复: 14 | |||
donnafeng金虫 (小有名气)
|
[求助]
怎么提高诱导表达的目的蛋白含量
|
||
|
BL21诱导表达的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8时添加IPTG 浓度0.1mM 28度诱导6h） 请教提高表达的方法 1 IPTG到底什么时候添加 有人说能摇到的最高OD值（大约2.0）一半时添加（即1.0） 有的说0.5的时候添加 到底应该选择什么时候添加 为什么 2 诱导表达时通气量高是有利于大肠杆菌的生长还是有利于蛋白表达 应不应该怎么通气量来提高目的蛋白表达 3 有的说缩短诱导表达时间到2~3h好 有的说低温长时间诱导表达好 到底应该怎么选才能提高表达量  [ Last edited by donnafeng on 2011-9-19 at 14:47 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有179人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 外源蛋白诱导表达量特别少，求大侠解惑
已经有10人回复
- 【专题】蛋白新纯化思路探讨
已经有26人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
- 【求助/交流】基因工程菌诱导蛋白表达的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白
已经有12人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金币+5): 谢谢 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金币+1): 鼓励分享！ 2011-09-20 11:45:19
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金币+5): 谢谢 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金币+1): 鼓励分享！ 2011-09-20 11:45:19
|
1、我们实验室一般在OD为0.6左右加IPTG，这个时期是细菌的对数生长期。（但有一次我在OD=1.0时加表达出的蛋白没看到影响） 2、溶氧量我们一般都不考虑，就在500ml的烧瓶中装200ml的LB诱导。 3、一般采取25—30度诱导，IPTG在0.1—0.4mM左右，低温诱导表达可溶性蛋白可能相对较多，而目的蛋白总量可能会减少，这要根据不同需要，需要摸索不同条件才能找到最大表达量。 |
4楼2011-09-19 16:09:44
wlt728
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 13652.1
- 散金: 977
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 2130
- 在线: 344.5小时
- 虫号: 275024
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金币+3): 对数生长末期还是中期? 大肠杆菌B21是耗氧的 减少装液量增加转数不是可以增加溶氧吗 2011-09-20 08:05:04
dhd997(金币+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金币+3): 对数生长末期还是中期? 大肠杆菌B21是耗氧的 减少装液量增加转数不是可以增加溶氧吗 2011-09-20 08:05:04
| 1:应该在对数生长期是诱导，此时菌体生长快速，也能合成更多的目的蛋白。所以你可以做一个生长曲线的实验。2：要是用三角瓶小试的话，你也没法增加通气量啊，如果你的菌是耗氧菌，溶氧过低是会抑制细菌生长的。如果你的目的蛋白是包涵体，可以试试低温诱导，如果不是，一般37℃诱导4h左右就差不多了。我诱导的时候，IPTG终浓度为0.1mM，高浓度IPTG是会抑制菌体生长的！ |
2楼2011-09-19 15:02:41
lijunqing525
金虫 (正式写手)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 1723.1
- 散金: 730
- 红花: 5
- 帖子: 846
- 在线: 162.2小时
- 虫号: 1362403
- 注册: 2011-08-06
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
3楼2011-09-19 15:39:26
donnafeng
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 867.2
- 散金: 15
- 帖子: 217
- 在线: 60.7小时
- 虫号: 47473
- 注册: 2004-06-05
- 专业: 食品科学基础
5楼2011-09-20 08:14:46
 |
6楼2011-09-20 08:37:12
wlt728
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 13652.1
- 散金: 977
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 2130
- 在线: 344.5小时
- 虫号: 275024
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 抗体工程学
7楼2011-09-20 09:46:47
wlt728
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 13652.1
- 散金: 977
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 2130
- 在线: 344.5小时
- 虫号: 275024
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 抗体工程学
8楼2011-09-20 13:00:34
imfly77
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 6
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 3065.8
- 散金: 234
- 红花: 2
- 帖子: 287
- 在线: 151.3小时
- 虫号: 1324638
- 注册: 2011-06-16
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
9楼2011-09-20 15:00:32
dasheng1980
铁杆木虫 (知名作家)
大圣
- 应助: 64 (初中生)
- 金币: 7702.4
- 红花: 3
- 沙发: 7
- 帖子: 8882
- 在线: 412.8小时
- 虫号: 1363851
- 注册: 2011-08-09
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2011-10-23 15:38:28
