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lyqifeih

新虫 (小有名气)

[求助] 求高手帮我分析下 PCR 实验电泳图，怎么改善！！！

第一次做PCR电泳，做的电泳图。
上游引物，Tm=62
下游引物，Tm=60
PCR的温度，95， 55， 72.
求高手帮我分析下怎么改善，今天汇报被老板狂骂！！PCR产物测序，全部错配。
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刚进入神经生物和电生理
1楼 2011-09-15 13:06:26
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lyqifeih

新虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-15 18:30:52
补充说明，老板说技术太差，我表示无语，样品DNA是从石蜡中提取，P了30循环。
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刚进入神经生物和电生理
2楼2011-09-15 13:08:15
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lyqifeih(金币+5): 是的，老板就是说不好！我也不知道不好在哪里！ 2011-09-15 16:50:10
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-15 18:31:01
感觉像是胶没有融好似的，电泳条带特异而且没有杂带，不像是PCR的问题
你没有用marker吗，这个条带是你的目的片段吗？
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似水流年
3楼2011-09-15 16:01:55
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-15 20:31:41
对呀，你的marker呢？谁知道是不是引物二聚体还是非特异性扩增呢？
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4楼2011-09-15 18:36:07
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
amisking: 2011-09-15 19:42:56
dhd997(金币+2): 补上 2011-09-15 20:31:50
1：先进行温度梯度的设定，找一个最好的温度，然后进行扩增
2：下游工作。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-09-15 19:10:12
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lpc0604

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5): Very Good！高额奖励，鼓励新虫发帖！ 2011-09-15 22:16:35
wanhscn: 鼓励继续交流。 2011-09-15 22:18:53
lyqifeih(金币+15): 2011-09-19 09:13:50
1、marker很必要；
2、添加阳性、阴性、空白对照才能说明问题；
3、凝胶成像要调节好光圈等；
4、PCR产物测序吸收峰重叠的可能性较大，也就是除非产物纯度高测序才能准确，如果条件允许，可以克隆到载体，用质粒或菌液测序在试试！
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6楼2011-09-15 22:07:36
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朱小坏
7楼2014-02-20 19:46:34
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