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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lyqifeih

新虫 (小有名气)

[求助] 求高手帮我分析下 PCR 实验电泳图,怎么改善!!!

第一次做PCR电泳,做的电泳图。
上游引物,Tm=62
下游引物,Tm=60
PCR的温度,95, 55, 72.
求高手帮我分析下怎么改善,今天汇报被老板狂骂!!PCR产物测序,全部错配。


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刚进入神经生物和电生理
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lyqifeih

新虫 (小有名气)

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-15 18:30:52
补充说明,老板说技术太差,我表示无语,样品DNA是从石蜡中提取,P了30循环。
刚进入神经生物和电生理
2楼2011-09-15 13:08:15
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lyqifeih(金币+5): 是的,老板就是说不好!我也不知道不好在哪里! 2011-09-15 16:50:10
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-15 18:31:01
感觉像是胶没有融好似的,电泳条带特异而且没有杂带,不像是PCR的问题
你没有用marker吗,这个条带是你的目的片段吗?
似水流年
3楼2011-09-15 16:01:55
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在雨中

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-15 20:31:41
对呀,你的marker呢?谁知道是不是引物二聚体还是非特异性扩增呢?
4楼2011-09-15 18:36:07
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
amisking: 2011-09-15 19:42:56
dhd997(金币+2): 补上 2011-09-15 20:31:50
1:先进行温度梯度的设定,找一个最好的温度,然后进行扩增
2:下游工作。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-09-15 19:10:12
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lpc0604

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5): Very Good!高额奖励,鼓励新虫发帖! 2011-09-15 22:16:35
wanhscn: 鼓励继续交流。 2011-09-15 22:18:53
lyqifeih(金币+15): 2011-09-19 09:13:50
1、marker很必要;
2、添加阳性、阴性、空白对照才能说明问题;
3、凝胶成像要调节好光圈等;
4、PCR产物测序吸收峰重叠的可能性较大,也就是除非产物纯度高测序才能准确,如果条件允许,可以克隆到载体,用质粒或菌液测序在试试!
6楼2011-09-15 22:07:36
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7楼2014-02-20 19:46:34
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