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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于大肠表达纯化过程中的两个小问题
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 关于大肠表达纯化过程中的两个小问题

首先是诱导的时候（我们是16度），老师总让温度稳稳的降到了16度再加IPTG，培养基热一点都不行，这是为什么啊，我感觉只要后边诱导表达过程温度控制好就行啊= =
还有就是蛋白胶脱色液里的乙酸和乙醇分别起什么作用啊，简单介绍下就行
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1楼 2011-09-07 14:25:46
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shuihaizi

金虫 (小有名气)
★ ★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-09-08 22:12:09
诱导的温度没有那么严格的，37度培养完，直接加IPTG再放到16度摇就行。至于第二个问题我不清楚。
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2楼2011-09-07 16:27:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+4, MolEPI+1): Good 2011-09-08 22:12:19
加乙醇或者甲醇是为了更容易洗脱考马斯亮蓝，加得越多洗脱越容易，结合在蛋白上的染料也容易洗下来。而冰乙酸是固定蛋白的，防止蛋白扩散。
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3楼2011-09-07 21:25:12
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guojianping

木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
估计导师是怕你摇过头，IPTG的诱导效果不好。其实没那么严格啦。稍微凉到室温差不多也就可以了
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4楼2011-09-08 14:50:42
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雪戎

新虫 (初入文坛)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
为什么真核基因结构中会出现内含子啊？
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5楼2011-09-08 20:34:50
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 雪戎 at 2011-09-08 20:34:50:
为什么真核基因结构中会出现内含子啊？

哦。。。哦感觉内含子的存在可以让基因的可变性或者说储存的遗传信息量更大
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西瓜
7楼2011-09-08 20:54:25
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
送鲜花一朵
dhd997(金币+1): 来点详细的？ 2011-09-09 07:57:10
引用回帖:
7楼: Originally posted by loveskyzhou at 2011-09-08 20:54:25:
哦。。。哦感觉内含子的存在可以让基因的可变性或者说储存的遗传信息量更大

有见地哦。不过要是把内含子换成等量的编码序列，会不会信息量更多呢?嘿嘿~
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8楼2011-09-08 22:13:30
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btx362237729

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
为什么我们做诱导从来没降低温度到16呢。。。。。
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9楼2011-09-09 12:40:09
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imfly77

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-09-07 21:25:12:
加乙醇或者甲醇是为了更容易洗脱考马斯亮蓝，加得越多洗脱越容易，结合在蛋白上的染料也容易洗下来。而冰乙酸是固定蛋白的，防止蛋白扩散。

我在SDS胶脱色时干过一件很傻的事，把缓冲液当成脱色液摇了一夜，然后第二天来啥条带都没了。

还好，重新染色-脱色，条带又有了
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10楼2011-09-09 13:56:12
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bubingwu

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我是先在37℃加上IPTG，然后就降到16℃表达，没有必要先降到16℃在加啊，你老师可能认为高温不利于表达，但是37℃不会对IPTG造成什么影响啊，所以我是在37℃加IPTG，然后在放到16℃下表达，没有问题啊，表达的很好啊！
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11楼2011-09-10 21:41:59
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by bubingwu at 2011-09-10 21:41:59:
我是先在37℃加上IPTG，然后就降到16℃表达，没有必要先降到16℃在加啊，你老师可能认为高温不利于表达，但是37℃不会对IPTG造成什么影响啊，所以我是在37℃加IPTG，然后在放到16℃下表达，没有问题啊，表达的很好 ...

恩 我也这么做的 想法一样 谢谢
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12楼2011-09-10 21:46:19
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雪戎6楼
2011-09-08 20:35   回复  
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