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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于大肠表达纯化过程中的两个小问题
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 关于大肠表达纯化过程中的两个小问题

首先是诱导的时候（我们是16度），老师总让温度稳稳的降到了16度再加IPTG，培养基热一点都不行，这是为什么啊，我感觉只要后边诱导表达过程温度控制好就行啊= =
还有就是蛋白胶脱色液里的乙酸和乙醇分别起什么作用啊，简单介绍下就行
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1楼 2011-09-07 14:25:46
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imfly77

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-09-07 21:25:12:
加乙醇或者甲醇是为了更容易洗脱考马斯亮蓝，加得越多洗脱越容易，结合在蛋白上的染料也容易洗下来。而冰乙酸是固定蛋白的，防止蛋白扩散。

我在SDS胶脱色时干过一件很傻的事，把缓冲液当成脱色液摇了一夜，然后第二天来啥条带都没了。

还好，重新染色-脱色，条带又有了
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10楼2011-09-09 13:56:12
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shuihaizi

金虫 (小有名气)
★ ★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-09-08 22:12:09
诱导的温度没有那么严格的，37度培养完，直接加IPTG再放到16度摇就行。至于第二个问题我不清楚。
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2楼2011-09-07 16:27:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+4, MolEPI+1): Good 2011-09-08 22:12:19
加乙醇或者甲醇是为了更容易洗脱考马斯亮蓝，加得越多洗脱越容易，结合在蛋白上的染料也容易洗下来。而冰乙酸是固定蛋白的，防止蛋白扩散。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-09-07 21:25:12
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guojianping

木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
估计导师是怕你摇过头，IPTG的诱导效果不好。其实没那么严格啦。稍微凉到室温差不多也就可以了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-08 14:50:42
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