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shuihaizi

金虫 (小有名气)

[求助] pUC19-SalI单酶切,连个2500片段,连不上?

最近在做单酶切连接,怎么也连不上,请大家帮忙!
pUC19和2500bp的目的片段通过SalI单酶切,进行连接,不知道什么原因总是连不上?
本不应该难连啊?
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-05 22:09:31:
载体或者目的片段去磷酸化,否则载体自连的较多,不易挑到!

表述有误,载体必须去磷酸化!
真相是最大的奢侈品
4楼2011-09-06 10:00:01
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查看全部 13 个回答

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励热心版版 2011-09-06 07:38:23
shuihaizi(金币+2): 2011-09-06 08:59:19
载体或者目的片段去磷酸化,否则载体自连的较多,不易挑到!
真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-05 22:09:31
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 比较准确! 2011-09-06 09:58:28
shuihaizi(金币+2): 2011-09-06 11:52:14
载体去磷酸化,不然会自连,目的片段可以不用去磷酸化的。做的时候加对照,以不加目的片段,只加酶切并去磷酸化的载体的连接液为对照,就能知道你载体去磷酸化的效果了。
3楼2011-09-06 09:53:27
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

你们的意思是没有去磷酸化,连上的可能性很小是吗?
另外,是不是因为我的目的片段太大啊?快和载体一样大了,不知道怎么样的连接比例较好?
5楼2011-09-06 11:51:57
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