| 查看: 2013 | 回复: 14 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
怎么P出单链DNA？
|
||
| 我们实验室需要单链DNA做实验，有什么好的方法得到单链DNA？非常紧急，请各位大侠帮助。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有293人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于两条DNA单链杂交技术
已经有4人回复
- 将两条单链DNA5‘5’端连接起来以后。。。
已经有11人回复
- 快崩溃了！ 如何预测单链DNA的二级结构？
已经有10人回复
- DNA合成仪能否合成环状单链DNA
已经有6人回复
- 用琼脂糖凝胶可以跑开单链和双链dna 吗
已经有4人回复
- 单链DNA做pcr模板可以吗
已经有4人回复
- 【求助/交流】双链DNA和单链DNA抗原性？
已经有3人回复
- 【求助/交流】提取DNA过程中是否会产生单链DNA？
已经有14人回复
- 【求助/交流】DNA的单链图
已经有5人回复
- 【求助/交流】如何检测单链DNA退火成功
已经有9人回复
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10643.1
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3706
- 在线: 792小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
2楼2011-09-01 11:42:33
3楼2011-09-01 12:30:16
4楼2011-09-01 13:20:17
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10643.1
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3706
- 在线: 792小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
5楼2011-09-01 16:11:08
xgxofdream
银虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 443.5
- 散金: 320
- 红花: 7
- 帖子: 1020
- 在线: 731.3小时
- 虫号: 435239
- 注册: 2007-08-25
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2011-09-01 20:42:45
 |
7楼2011-09-02 16:59:09
8楼2011-09-03 09:33:04
xgxofdream
银虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 443.5
- 散金: 320
- 红花: 7
- 帖子: 1020
- 在线: 731.3小时
- 虫号: 435239
- 注册: 2007-08-25
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+6, MolEPI+1): Good!回答很详细，辛苦了哦！ 2011-09-04 18:49:23
lyqifeih(金币+20): 2011-09-05 08:17:44
西瓜(金币+6, MolEPI+1): Good!回答很详细，辛苦了哦！ 2011-09-04 18:49:23
lyqifeih(金币+20): 2011-09-05 08:17:44
|
其实那也不是什么很好的方法，如果你单纯是为了得到ssDNA做阳性对照的话，十分建议合成。如果你是为了建立某种检测方案的话... 目前扩增产物是单链的DNA扩增方法有：NASBA，SDA，RCA等等温扩增方案。这些你可以去google上搜索。 我提到的那个方法比较复杂，也费钱： 1）首先 合成引物的时候，将其中一个引物（上游或者下游引物）的5‘end用ddNTP封闭住。（生工可以合成，另加500大洋的修饰费） 2）正常PCR程序 3）购买T7 外切酶或者lamada外切酶（www.neb-china.com上有卖，大概670多大洋） 4）用上述酶消化你的PCR产物，由于ddNTP-5’-Primer的存在，你的dsDNA产物中有一条链的5‘ end是被ddNTP封闭的，所以酶只能消化其中的一条链，所以最终你得到了单链。 注意：我建议用biotin代替ddNTP封闭引物的5’end。因为我不清楚酶是否对ddNTP敏感。 |
9楼2011-09-04 15:36:44
xgxofdream
银虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 443.5
- 散金: 320
- 红花: 7
- 帖子: 1020
- 在线: 731.3小时
- 虫号: 435239
- 注册: 2007-08-25
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2011-09-04 15:39:05
