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xgxofdream

银虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+6, MolEPI+1): Good!回答很详细，辛苦了哦！ 2011-09-04 18:49:23
lyqifeih(金币+20): 2011-09-05 08:17:44

引用回帖:

1楼: Originally posted by lyqifeih at 2011-09-01 11:00:40:
我们实验室需要单链DNA做实验，有什么好的方法得到单链DNA？非常紧急，请各位大侠帮助。

其实那也不是什么很好的方法，如果你单纯是为了得到ssDNA做阳性对照的话，十分建议合成。如果你是为了建立某种检测方案的话...

目前扩增产物是单链的DNA扩增方法有：NASBA，SDA，RCA等等温扩增方案。这些你可以去google上搜索。

我提到的那个方法比较复杂，也费钱：

1）首先合成引物的时候，将其中一个引物（上游或者下游引物）的5‘end用ddNTP封闭住。（生工可以合成，另加500大洋的修饰费）

2）正常PCR程序

3）购买T7 外切酶或者lamada外切酶（www.neb-china.com上有卖，大概670多大洋）

4）用上述酶消化你的PCR产物，由于ddNTP-5’-Primer的存在，你的dsDNA产物中有一条链的5‘ end是被ddNTP封闭的，所以酶只能消化其中的一条链，所以最终你得到了单链。

注意：我建议用biotin代替ddNTP封闭引物的5’end。因为我不清楚酶是否对ddNTP敏感。