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xgxofdream

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lyqifeih(金币+8): 2011-09-14 11:46:00
NASBA or SDA or RCA + isothermal amplification 搜索

NASBA: nucleic acid sequence based amplification
这是一种扩增RNA的技术,产物也是RNA。需要用到3种酶
SDA: strand displacement amplification
该技术发明之初用于DNA扩增,扩增产物有ssDNA,同时也有dsDNA。产物复杂。配合反转扩增技术,它也有用于扩增RNA的报道
RCA: rolling circle amplification
该技术实质上是一种利用信号扩增的策略检测DNA或者RNA的技术。它的产物不是目标核酸片段,而是大量的探针分子。
学习雷锋,好榜样,忠于人民忠于党
11楼2011-09-11 13:24:25
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

楼上的方法不错呢,但是不是很复杂啊
我想楼主是否需要扩增特定的DNA单链?

可以试一下这个方法:

随意的PCR产物,煮沸5min后急剧降温,OK了
12楼2011-09-11 13:31:39
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szp0401

木虫 (正式写手)

楼主这个问题解决了吗/我最近也在做100nt左右的单链,但老不成功,很是着急
13楼2012-06-18 13:43:54
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peng~yu

银虫 (小有名气)

不对称PCR我看过相关的文献,貌似这种方法理论上是可行的,就是上下游引物加的量不一样就行,我的印象是那篇文献用的是50:1的引物比例,但是有一点就是说在其中一种引物没有消耗完全之前双链是指数型增长的,但是消耗完以后单链是线性增长的~所以产率可能会比较低。。我最近也想做这个来着。。
14楼2012-06-26 14:15:54
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peng~yu

银虫 (小有名气)

想起来了上下引物的比例是50:0.5
15楼2012-06-26 14:17:42
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