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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » rhG-CSF不表达
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dengxuepeng

金虫 (小有名气)

[求助] rhG-CSF不表达

rhG-CSF已经上市，但价格昂贵，所以实验室想自己表达。已知rhG-CSF的氨基酸序列，根据大肠杆菌密码子偏爱性设计了基因序列，分别使用了pET32a、 pET11a 、pBV220三个表达载体，转化大肠杆菌，但电泳看不到表达，且诱导前后没有什么大的区别，不知道是哪里出了问题。查阅文献时，很多人成功构建了大肠杆菌表达系统，但我按文献上做怎么做不出来呢？前后纠结了好几个月了。。。。

哪位高手能帮忙解决问题，不胜感激！！！！
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在工作中享受生活。
1楼 2011-08-29 15:43:42
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

dengxuepeng(金币+5): 2011-09-01 11:19:12
首先确定你的表达体系有没有问题，如果这个表达体系能够对其它蛋白进行表达，说明体系没问题。体系的验证可以用GFP，直观，快速。
如果不是体系的问题，那可能就是基因或者载体构建的问题，电泳无表达，可以试试ELISA什么的，也有可能是抗体的原因。
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3楼2011-09-01 11:03:16
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

dengxuepeng(金币+5): 2011-09-01 11:19:20
你可以上图来交流的
赞一下 回复此楼
4楼2011-09-01 11:03:25
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