应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
51/1返回列表
查看: 2418  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

njunkai

新虫 (初入文坛)

[求助] 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！

做融合蛋白的分离纯化，第一次纯化以1ml破菌后的融合蛋白溶液：0.4ml的亲和层析树脂进行纯化去除杂蛋白，基本可以洗脱完全杂蛋白，这亲和树脂的量是足够的。然后将洗脱的融合蛋白进行透析复性，冷冻干燥。
通过其羟胺裂解位点来裂解开目的蛋白和载体蛋白。。。羟胺裂解由于效率不高，故其还有剩余的融合蛋白，所以裂解后电泳的条带就有三条了：未裂解的融合蛋白、载体蛋白和目的蛋白。现在进行二次过亲和层析柱，因为参照前面第一次纯化，羟胺裂解，理应这羟胺裂解蛋白浓度是比第一次纯化时蛋白要低的，可按照这个裂解后的溶液按照1ml裂解液：0.4ml亲和层析树脂进行二次纯化，可洗脱下来的就是不单单只有目的蛋白啊 ！！！这怎么回事呢？麻烦各位懂的大虾们帮小弟解答下！！！谢谢啊！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-28 11:13:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njunkai

新虫 (初入文坛)
恩，你理解完全没有问题，我就是这么做的，就是发现第二次纯化时，挂不上柱。。。后面到处问了下，说有可能是羟胺裂解后其pH太高，另一个是盐浓度太高，而影响了蛋白与树脂的结合能力。。。所以羟胺裂解后要进行透析下，然后再上柱结合才行。。。
赞一下 回复此楼
8楼2011-08-29 16:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

njunkai

新虫 (初入文坛)
还是自己沙发！！！各位有做这一块的辛苦你们给我解释下！！！很纠结额啊！！！
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-28 11:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
adslye(金币+2): 感谢专家点评~~嘿嘿~~看你头像，是指弹？还是弹唱？ 2011-08-28 18:14:12
有标签的就能结合，你想一下哪个有标签
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-08-28 15:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiehe_ai

金虫 (著名写手)

额

【答案】应助回帖

★ ★ ★
adslye(金币+3): 很认真，鼓励认真，鼓励继续深入讨论！ 2011-08-29 09:50:22
不是很了解融合蛋白的纯化。
不知你那亲和胶是什么胶，配体是什么。也不知道你二次纯化后杂蛋白是多还是微量。
有没有这种可能：没有裂解的融合蛋白和目的蛋白一起挂柱再被洗脱，造成你的二次纯化不纯。
还有你用的胶蛋白配体会不会有脱落。有时亲和胶用太久了或胶本身就不好的话，会有配体脱落的现象。若配体是蛋白且有脱落，肯定不纯了。不过这种情况应该是痕量的，第一种可能性大些。
赞一下(1人) 回复此楼
夫天地者,万物之逆旅也；光阴者,百代之过客也。而浮生若梦，为欢几何？古人秉烛夜游，良有以也。况阳春召我以烟景，大块假我以文章。
4楼2011-08-28 19:15:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +8 zju2000 2026-09-26 9/450 2026-09-29 13:47 by ahsoarli
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭