| 查看: 2352 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
|
|||
|
做融合蛋白的分离纯化，第一次纯化以1ml破菌后的融合蛋白溶液：0.4ml的亲和层析树脂进行纯化去除杂蛋白，基本可以洗脱完全杂蛋白，这亲和树脂的量是足够的。然后将洗脱的融合蛋白进行透析复性，冷冻干燥。 通过其羟胺裂解位点来裂解开目的蛋白和载体蛋白。。。羟胺裂解由于效率不高，故其还有剩余的融合蛋白，所以裂解后电泳的条带就有三条了：未裂解的融合蛋白、载体蛋白和目的蛋白。现在进行二次过亲和层析柱，因为参照前面第一次纯化，羟胺裂解，理应这羟胺裂解蛋白浓度是比第一次纯化时蛋白要低的，可按照这个裂解后的溶液按照1ml裂解液：0.4ml亲和层析树脂进行二次纯化，可洗脱下来的就是不单单只有目的蛋白啊 ！！！这怎么回事呢？麻烦各位懂的大虾们帮小弟解答下！！！谢谢啊！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
重要消息，中午系统在维护
已经有12人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有20人回复
-
言之凿凿，8月21号(明天)放榜
已经有14人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有17人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有21人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有125人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有15人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有13人回复
-
为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？
已经有5人回复
-
今天放榜没戏了吧
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助，同一种材料，算不同结构时，ISIF取几呢
已经有5人回复
- 100字的短中文摘要求助翻译成英文
已经有1人回复
- 求助可再生燃料或催化剂方面，审稿较快或比较好中的杂志，要求Q2区及以上，谢谢！
已经有8人回复
- 酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示？？
已经有13人回复
- 请教盐酸胍助溶冻干蛋白干粉时，羟胺裂解后 ，跑电泳问题！！！！
已经有5人回复
- 【求助/交流】求教蛋白酶的分离纯化中遇到的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】蛋白质纯化的疑难问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于分子筛纯化蛋白的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白的Amylose亲和层析
已经有11人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
4楼2011-08-28 19:15:02
2楼2011-08-28 11:14:28
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19803.2
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6619
- 在线: 2793.8小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
3楼2011-08-28 15:57:31
imfly77
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 2
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 3065.8
- 散金: 234
- 红花: 2
- 帖子: 287
- 在线: 151.3小时
- 虫号: 1324638
- 注册: 2011-06-16
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
★ ★ ★
adslye(金币+3): 感谢交流~~请继续深入讨论吧~~ 2011-08-29 09:57:53
adslye(金币+3): 感谢交流~~请继续深入讨论吧~~ 2011-08-29 09:57:53
|
http://www.muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3469491 你的纯化思路和这篇帖子里提的文献有点像。 正如3楼所说，有标签的就能结合，所以如果亲和柱效率足够高，从穿透峰里能够得到比较纯的目的蛋白。 |
5楼2011-08-29 08:22:24
