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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 可溶性蛋白和包涵体

有没有人能跟我说说诱导后的菌液加入上样缓冲液后煮沸，离心取上清跑电泳得到的是全蛋白（可溶性蛋白和包涵体），而用超声波破碎细胞的上清为什么就是可溶性蛋白了呢？不都是破碎了细胞吗？还有我们实验室只有超声波清洗仪，这个可以用来破碎细胞吗？我还看到有文献中说“渗透休克”，也就是将菌体先放在低渗溶液中，然后再放在高渗溶液中，然后离心取上清，那么上清中的蛋白是不是就是可溶性蛋白啊？比较迷糊，望高人指点！
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1楼 2011-08-25 14:45:35
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imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
friya0910(金币+2): 2011-08-26 11:50:38
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 解答很精彩 2011-08-26 17:27:23
（1）包涵体是细胞里表达的不可溶的蛋白聚集体，只有通过变性剂才能溶解。
（2）超声破碎不涉及蛋白变性，所以包涵体仍然在沉淀中，上清只有可溶蛋白；而菌液加入上样缓冲液后煮沸，包括包涵体在内的所有蛋白都被变性溶解，也就是总蛋白。
（3）超声清洗仪不能用来超声破碎细胞——所谓的超声破碎，主是依靠超声探头产生的剪切力。
（4）“渗透休克”不能够让不可溶蛋白重新溶解，所以上清得到的只是可溶蛋白。另外虽然我没做过渗透休克，但从原理上来看，破碎效率应该不会很好——比如可能和溶菌酶效果接近。

所以建议楼主还是申请买一个超声破碎仪吧，国产的也不贵，买的时候注意咨询商家关于探头的信息。
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4楼2011-08-26 08:55:16
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xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 鼓励下 2011-08-25 17:24:48
清洗用的超声破碎仪应该也可以做细胞破碎，不过一些参数（比如 探头的振幅、间歇时间等）要按不同用途设置好。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-08-25 15:13:11
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jtliuok

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 学习了！ 2011-08-25 18:39:45
friya0910(金币+5): 2011-08-26 11:50:32
因为超声破碎离心之后包涵体在沉淀中，可溶性蛋白在上清中。而直接吸取菌液煮沸后包涵体会破裂，与可溶性蛋白一起在上清中
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2011-08-25 18:28:26
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