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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 可溶性蛋白和包涵体
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jtliuok

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 学习了！ 2011-08-25 18:39:45
friya0910(金币+5): 2011-08-26 11:50:32
因为超声破碎离心之后包涵体在沉淀中，可溶性蛋白在上清中。而直接吸取菌液煮沸后包涵体会破裂，与可溶性蛋白一起在上清中
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3楼2011-08-25 18:28:26
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imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1):谢谢参与
friya0910(金币+2): 2011-08-26 11:50:38
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 解答很精彩 2011-08-26 17:27:23
（1）包涵体是细胞里表达的不可溶的蛋白聚集体，只有通过变性剂才能溶解。
（2）超声破碎不涉及蛋白变性，所以包涵体仍然在沉淀中，上清只有可溶蛋白；而菌液加入上样缓冲液后煮沸，包括包涵体在内的所有蛋白都被变性溶解，也就是总蛋白。
（3）超声清洗仪不能用来超声破碎细胞——所谓的超声破碎，主是依靠超声探头产生的剪切力。
（4）“渗透休克”不能够让不可溶蛋白重新溶解，所以上清得到的只是可溶蛋白。另外虽然我没做过渗透休克，但从原理上来看，破碎效率应该不会很好——比如可能和溶菌酶效果接近。

所以建议楼主还是申请买一个超声破碎仪吧，国产的也不贵，买的时候注意咨询商家关于探头的信息。
赞一下(5人) 回复此楼
4楼2011-08-26 08:55:16
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