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西风的安逸

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA提取方法 已有6人参与

1.  取茎秆于液氮中快速研磨,直至白色粉末。用药勺将粉末舀至装有1毫升Trizol的EP管中,并迅速摇匀,看到溶液呈均匀的乳状即可。
2.  4摄氏度、10000rpm离心2~5分钟。
3   取上清,加入200微升氯仿,盖好盖,剧烈震荡。
4.  4摄氏度、10000rpm离心4~6分钟,RNA在上层睡相中。
5.  取上清,大概400微升(注意:不要吸到其他层),转移到新的离心管中,加入等体积的异丙醇(400微升),摇匀。
6.  4摄氏度、10000rpm离心4~5分钟即可。
7.  将上清倒掉,加入1毫升75%乙醇(750微升无水乙醇+250微升DEPC水)洗涤沉淀。
8.  4摄氏度、5000rpm离心2~3分钟。
9.  倒掉上清,用移液枪将剩余的溶液吸干,注意不要吸到下面的沉淀(吸的时候保证沉淀在上)。
10.  室温水平放置晾干。
11.  加30微升DEPC水溶解RNA,混匀。
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既然选择了远方就要风雨兼程
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
仅供参考:我们是专门做小RNA的,我们加了异丙醇后,都是在室温下静置5-10分钟。有必要的话可以再用氯仿抽提一次,不过做一次我们一般就可以得到20-30微克甚至更多的RNA ,所以我们都是抽提一次。还有离心速度和时间,我们是12000g,时间一般都是大于10分钟的。
9楼2011-10-17 18:14:21
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mjliu1988

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): Good 2011-08-23 23:22:44
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中;
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟;
75%的乙醇洗两次,增加纯度。
这是我们实验室的做法,仅供参考……
为科学献身
2楼2011-08-23 15:57:18
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西风的安逸

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mjliu1988 at 2011-08-23 15:57:18:
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中;
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟;
75%的乙醇洗两次,增加纯度。
这是我们实验室的做法,仅供参考……

谢谢补充,顶一下
既然选择了远方就要风雨兼程
3楼2011-08-23 19:37:44
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
可不可以两次用氯仿沉淀蛋白,以求彻底除掉蛋白
风雪夜归人
4楼2011-08-24 17:18:42
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