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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取方法
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西风的安逸

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA提取方法 已有6人参与

1.  取茎秆于液氮中快速研磨，直至白色粉末。用药勺将粉末舀至装有1毫升Trizol的EP管中，并迅速摇匀，看到溶液呈均匀的乳状即可。
2.  4摄氏度、10000rpm离心2~5分钟。
3   取上清，加入200微升氯仿，盖好盖，剧烈震荡。
4.  4摄氏度、10000rpm离心4~6分钟，RNA在上层睡相中。
5.  取上清，大概400微升（注意：不要吸到其他层），转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇（400微升），摇匀。
6.  4摄氏度、10000rpm离心4~5分钟即可。
7.  将上清倒掉，加入1毫升75%乙醇（750微升无水乙醇+250微升DEPC水）洗涤沉淀。
8.  4摄氏度、5000rpm离心2~3分钟。
9.  倒掉上清，用移液枪将剩余的溶液吸干，注意不要吸到下面的沉淀（吸的时候保证沉淀在上）。
10.  室温水平放置晾干。
11.  加30微升DEPC水溶解RNA，混匀。
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既然选择了远方就要风雨兼程
1楼 2011-08-22 18:52:00
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mjliu1988

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): Good 2011-08-23 23:22:44
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中；
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟；
75%的乙醇洗两次，增加纯度。
这是我们实验室的做法，仅供参考……
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为科学献身
2楼2011-08-23 15:57:18
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西风的安逸

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mjliu1988 at 2011-08-23 15:57:18:
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中；
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟；
75%的乙醇洗两次，增加纯度。
这是我们实验室的做法，仅供参考……

谢谢补充，顶一下
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既然选择了远方就要风雨兼程
3楼2011-08-23 19:37:44
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
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可不可以两次用氯仿沉淀蛋白，以求彻底除掉蛋白
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风雪夜归人
4楼2011-08-24 17:18:42
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xiaoke2046

木虫 (知名作家)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): good 2011-08-24 19:30:49
引用回帖:
2楼: Originally posted by mjliu1988 at 2011-08-23 15:57:18:
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中；
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟；
75%的乙醇洗两次，增加纯度。
这是我们实验室的做法，仅供参考……

请问加入异丙醇沉淀过程静置5分钟是室温静置还是低温（-20℃）？
75%乙醇洗两次是如何洗法？是洗一次，离心，弃上清，再洗一次，再离心，再弃上清吗？

[ Last edited by xiaoke2046 on 2011-8-24 at 19:25 ]
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5楼2011-08-24 19:22:10
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西风的安逸

铜虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-25 16:48:15
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoke2046 at 2011-08-24 19:22:10:
请问加入异丙醇沉淀过程静置5分钟是室温静置还是低温（-20℃）？
75%乙醇洗两次是如何洗法？是洗一次，离心，弃上清，再洗一次，再离心，再弃上清吗？
[ Last edited by xiaoke2046 on 2011-8-24 at 19 ...

因为我们的操作一直都是在冰盒上进行的，就是为了防止RNA被降解，所以静置还是应该在-20℃下
洗涤的方法正如你所说的
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既然选择了远方就要风雨兼程
6楼2011-08-25 09:34:13
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小白虾

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 图？ 2011-09-08 07:39:49
可以采用试剂盒 ，效果还是比较理想的，附图
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飞的更高
7楼2011-09-05 14:40:50
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lizongran

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 感谢交流 2011-09-08 07:39:59
转速可再高些，12000rpm
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8楼2011-09-07 20:16:27
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
仅供参考：我们是专门做小RNA的，我们加了异丙醇后，都是在室温下静置5-10分钟。有必要的话可以再用氯仿抽提一次，不过做一次我们一般就可以得到20-30微克甚至更多的RNA ,所以我们都是抽提一次。还有离心速度和时间，我们是12000g，时间一般都是大于10分钟的。
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9楼2011-10-17 18:14:21
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