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西风的安逸

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA提取方法 已有6人参与

1.  取茎秆于液氮中快速研磨,直至白色粉末。用药勺将粉末舀至装有1毫升Trizol的EP管中,并迅速摇匀,看到溶液呈均匀的乳状即可。
2.  4摄氏度、10000rpm离心2~5分钟。
3   取上清,加入200微升氯仿,盖好盖,剧烈震荡。
4.  4摄氏度、10000rpm离心4~6分钟,RNA在上层睡相中。
5.  取上清,大概400微升(注意:不要吸到其他层),转移到新的离心管中,加入等体积的异丙醇(400微升),摇匀。
6.  4摄氏度、10000rpm离心4~5分钟即可。
7.  将上清倒掉,加入1毫升75%乙醇(750微升无水乙醇+250微升DEPC水)洗涤沉淀。
8.  4摄氏度、5000rpm离心2~3分钟。
9.  倒掉上清,用移液枪将剩余的溶液吸干,注意不要吸到下面的沉淀(吸的时候保证沉淀在上)。
10.  室温水平放置晾干。
11.  加30微升DEPC水溶解RNA,混匀。
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既然选择了远方就要风雨兼程
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西风的安逸

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mjliu1988 at 2011-08-23 15:57:18:
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中;
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟;
75%的乙醇洗两次,增加纯度。
这是我们实验室的做法,仅供参考……

谢谢补充,顶一下
既然选择了远方就要风雨兼程
3楼2011-08-23 19:37:44
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mjliu1988

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): Good 2011-08-23 23:22:44
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中;
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟;
75%的乙醇洗两次,增加纯度。
这是我们实验室的做法,仅供参考……
为科学献身
2楼2011-08-23 15:57:18
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
可不可以两次用氯仿沉淀蛋白,以求彻底除掉蛋白
风雪夜归人
4楼2011-08-24 17:18:42
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xiaoke2046

木虫 (知名作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-08-24 19:30:49
引用回帖:
2楼: Originally posted by mjliu1988 at 2011-08-23 15:57:18:
可将Trizol直接加到研钵中研磨后快速装入EP管中;
加入异丙醇醇沉的过程中可静置5分钟;
75%的乙醇洗两次,增加纯度。
这是我们实验室的做法,仅供参考……

请问加入异丙醇沉淀过程静置5分钟是室温静置还是低温(-20℃)?
75%乙醇洗两次是如何洗法?是洗一次,离心,弃上清,再洗一次,再离心,再弃上清吗?

[ Last edited by xiaoke2046 on 2011-8-24 at 19:25 ]
5楼2011-08-24 19:22:10
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