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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

[求助] 求高手指点RNA电泳图~~~~

第一次提RNA,用的是RNA iso plus,提取完后用普通1.2%的琼脂糖凝胶电泳跑的,电泳仪等用前均用DEPC水处理过,感觉过程中比较小心,但是结果还是不尽如人意,没有看到明显的18s 和28s,我是继续提纯呢,还是重提RNA呢,请各位提点意见~~谢谢
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-28 09:45:46
wanghd2826(金币+10): 多谢西瓜~ 2011-08-29 09:37:47
引用回帖:
9楼: Originally posted by wanghd2826 at 2011-08-26 09:02:47:
另外,电泳用的是普通1%的琼脂糖凝胶,100V跑了40min吧(不会跑的过程中降解了吧)

40 min太久啦!跑胶过程降解是有可能的,我自己碰到过,当时测OD值看着挺好,未有降解的迹象,但是跑胶却拖尾。猜测是跑胶的问题,然后把缓冲液换成新的再跑,就得到很漂亮的图了。
跑胶的主要目的是看有没有降解和污染,只要看到5S和18S两条亮带没有拖尾就可以了。100V的话10到15分钟已经能区分开这两条带了,没必要跑太久,跑得越久越容易降解。
10楼2011-08-26 17:25:43
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 同意 2011-08-20 22:32:10
重提吧,降解的很厉害呢。
风雪夜归人
2楼2011-08-20 09:07:11
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-08-20 09:07:11:
重提吧,降解的很厉害呢。

同感啊 我觉的得重提了,RNA酶简直防不胜防啊。。。郁闷
3楼2011-08-20 09:19:10
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monkey491816

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-20 20:03:44
应该是你的RNA提取的不好,我之前提取RNA是电泳仪都没有什么处理跑出来的结果肯定是3条带的,胶你用0.8%-1%就可以啦。RNA降解很严重,且有蛋白污染。重新提取一次吧
4楼2011-08-20 15:49:36
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